在这一进程中，ELISA试剂盒一般情况下有三次加样，它们分别是加标本，加酶物，加底物。冻住血清融解后，蛋白质部分浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，防止气泡，可上下倒置混和，不要在混匀器上激烈振荡。
ELISA试剂盒包被条件的优化：
1、包被液的选择：一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液，假如包被的抗原在碱性条件下不稳定的话，也能够运用pH7.2的磷酸盐缓冲液。
2、包被浓度的选择：包被的最适浓度随固相载体和包被物的性质改动，一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml，ELISA试剂盒要明晰关于特定包被抗原的最适包被浓度需求经过试验来断定。
3、包被温度的选择：一般是4-8度条件下放置一个黑夜或许37度保温2小时，咱们激烈建议4-8度条件下包被，有利于蛋白活性的坚持。
4、包被抗原的选择：ELISA试剂盒可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类。小分子抗原比方多肽以及一些小分子有机化合物，由于分子量太小，一般难于直接吸附在酶标板上，一般都先使其与无关蛋白质，比方BSA等偶联，偶联物吸附于固相载体上。