利用
ELISA试剂进行检测的样本类型包括常见的血液(血清、血浆),组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清以及不常见的皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水等,这些样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到ELISA实验的结果。下面对常见细胞样本处理方法整理,希望对您有所帮助。
利用ELISA进行检测的样本类型包括常见的血液(血清、血浆),组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清以及不常见的皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水等,这些样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到ELISA实验的结果。下面对常见细胞样本处理方法整理,希望对您有所帮助。
细胞裂解液:
贴壁细胞需要先用胰酶消化,离心收集细胞(悬浮细胞可直接离心收集);
将收集到的细胞用冷 PBS 洗3次;
物理方法裂解细胞(可先超声破碎细胞,再反复冻融):
超声破碎:取适量PBS 重悬细胞,用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂。
反复冻融:将待破碎的细胞在-20℃以下冰冻,室温融解,反复3次,使细胞溶胀破碎;
将标本于2-8 度 1500×g 离心 10 分钟,收集上清备用。
注: 一般情况下,物理方法如反复冻融,匀浆等方法会比化学方法好,因为化学方法会引入酸或碱,可能会对
ELISA试剂实验产生影响。利用化学的细胞裂解液裂解细胞,如果去污剂成分会干扰抗原抗体反应影响检测效果,推荐利用透析和超滤的方法除去去污剂成分。
样本保存:
处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程,由于蛋白容易变性,降解,故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要,尤其注意不要反复冻融,样本处理之后可分装密封保存, 4 度保存应小于 1 周,-20 度不应超过 1 个月,-80度不应超过2个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。