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人(Human)cd206 分子(cd206)ELISA 检测试剂盒的应用
时间: 2023-11-20 10:28:45
       人(Human)cd206 分子(cd206)ELISA 检测试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其它相关生物液体中抗角蛋白抗体(AKA)浓度。检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗角蛋白抗体人(Human)cd206 分子(cd206)ELISA 检测试剂盒抗体包被于酶标板上,实验时样品(或标准品)中的抗角蛋白抗体(AKA)会与包被抗体结合,游离的成分被洗去,然后依次加入生物素化的抗角蛋白抗体人(Human)cd206 分子(cd206)ELISA 检测试剂盒抗体,HRP-链霉亲和素结合物,最后加入单组份TMB底物液。TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,抗角蛋白抗体(AKA)浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中抗角蛋白抗体人(Human)cd206 分子(cd206)ELISA 检测试剂盒的浓度。

人(Human)cd206 分子(cd206)ELISA 检测试剂盒

样品收集:
1.血清:全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。
2.血浆:抗凝剂推荐使用EDTA-Na2,样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。避免使用溶血,高血脂样品。
3.组织匀浆:用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
4.细胞培养上清:取细胞培养上清于1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
操作步骤:
1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。
4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5.每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。避免光照。
8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。
 人(Human)cd206 分子(cd206)ELISA 检测试剂盒结果判断与分析:
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的指标标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

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