羊α酪蛋白(α-Casein)ELISA试剂盒实验是一种敏感性高, 特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存, 操作简便.结果判断较客观等因素,已旷泛应用在免疫学检脸的各域中。
[实验原理]
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被山羊α酪蛋白(α-Casein)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的羊α酪蛋白(α-Casein)ELISA试剂盒呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
[样本处理及要求]
1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
[需要而未提供的试剂和器材]
1.酶标仪(450nm)
2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水
[试剂盒性能]
1. 检测范围:15 μg/mL – 480 μg/mL。
2. 灵敏度:最低检测浓度小于1.0 μg/mL。
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。
[说明]
1.由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析,本产品可能存在一定的质量技术风险。
2.最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关,请务必准备充足的标本备份。
3.不同批次的同一产品可能会有少许差别,如:检测限、灵敏度以及显色时间等,请依据试剂盒内说明书进行实验操作,网站电子版说明书仅作参考。
4.只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果,不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到最佳的检测结果。
5.本公司只对试剂盒本身负责,不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责,请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量,预留充足的样本。
6.使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。
7.若样本为细胞培养上清,因该类样本干扰因素较多,如:细胞状态、细胞数量、采样时间等,所以可能存在检测不出的情况。
8.某些天然蛋白或重组蛋白,包括原核及真核重组蛋白,可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配,而不被检测出。
上海晶抗生物工程有限公司的产品在相当宽的领域得到广泛的应用,长期和各大高校、研究机构、工厂、企业等建立了深厚的合作关凢系,我们的企业文化是为树立行业的领先地位而不懈努力,为科研事业贡献绵薄之力!公司的核心价值是诚信为本,为客户提供高品质的产品、为员工提供发展平台、为社会创造更多价值。