ELISA试剂盒是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术。ELISA试剂盒检测类型主要的有四种,直接法、间接法、夹心法和竞争法。
1、ELISA试剂盒直接法
在ELISA试剂盒直接法中,样品中的抗原或抗体以非特异性方式直接吸附在包被板上。然后,将特异性测定抗体或抗原连接到孔中。之后,测定底物被用来产生可测量的颜色变化,并在读板器上进行量化。
由于这种检测方法步骤少,速度快,而且比其他ELISA试剂盒方法少有机会引入错误。然而,由于吸附步骤是非特异性的,背景噪音可能很高。没有二级抗体步骤意味着没有信号放大,降低了检测灵敏度。它还需要为每个所需目标创建共轭测定抗体/抗原。
2、ELISA试剂盒间接法
ELISA试剂盒间接法,或称iELISA试剂盒,初于1978年开发,用于检测人血清白蛋白,其工作方式与ELISA试剂盒直接法非常相似,只是增加了一个二级抗体步骤。这使得测试信号得到放大,克服了ELISA试剂盒直接法的局限性。
它还否定了对目标特异性共轭测定抗体/抗原的需要,因为共轭的二级抗体只需要对一级抗体具有物种特异性。如果总的样品抗原被结合到包被板上,就像ELISA试剂盒直接法一样,背景噪音仍然是一个问题。
然而,如果该检测方法用于检测样品抗体,纯化的目标抗原被涂在板上,而一级抗体来自于样品。这大大减少了背景噪音,因此这些检测方法在确定样品中的抗体滴度时受欢迎。
3、ELISA试剂盒夹心法
ELISA试剂盒夹心法将抗原夹在抗体之间,该技术开发于1977年,可以采用ELISA试剂盒直接或间接法的形式(上面描述的ELISA试剂盒夹心法是基于ELISA试剂盒间接法),除了抗原与检测板的非特异性结合,捕获抗体使其成为一个特异性的过程。这种组合进一步提高了检测的灵敏度和特异性。
然而,它们确实需要确定兼容的捕获和测定抗体对才能有效地发挥作用,而且可能有交叉反应的问题。这种检测方法通常也有多的步骤,提供了大的出错机会。由于抗原结合步骤的选择性,ELISA试剂盒夹心法在抗原处于复杂混合状态时特别有用,因为不需要纯化抗原。