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检测ELISA试剂盒的间接法

时间： 2024-03-29 09:52:58

ELISA试剂盒试验是一种敏感性高，特异性强，ELISA试剂盒重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的ELISA试剂盒。

ELISA试剂盒

用于ELISA试剂盒未知抗体的间接法步骤如下：

1. 用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过*。次日洗涤3次。

2. 加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)

3.于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,后一遍用DDW洗涤。

4.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

5.终止反应

6.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA试剂盒仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

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