目前各种形式的ELISA试剂盒自动分析仪已经进入市场，如广泛应用于血站系统的微板式全自动酶免分析仪，其试剂为开放式的，而对于其它类型的，则试剂和仪器往往是配套的。但当前大部分医学实验室均采用手工操作加仪器测定的方式。ELISA试剂盒操作步建复杂，操作不当将引起较大的误差。以下叙述各个步骤中的影响因素。加样器是一种比较精密的工具，其在长时间使用时会因机械毫损或者推动杆内附着血疯等原因造成加样不准，尤其是对于样本量较大的临床实验室，因此必须定期对加液器进行维护和校准。每次加不同的标本时均需更换吸嘴，以免发生交叉污染。加样时速度不可太快，避免将标本加在孔壁上部，并注意不要溅出或产生气泡。加样时还应当注意操作时差对结果的影响，操作时差是指加入标本、ELISA试剂盒及混匀时间的差异。操作时差在每个实验中都存在，尤其是手工操作，日常检测标本多达几百个，从加入个标本到后一个标本，需几十分钟，加入试剂及混匀等均存在着前后时间差异，使抗原抗体反应和酶促反应时间不一致，影响更大在加酶结合物和底物时可用定量多道。ELISA试剂盒质量保证是一个复杂的过程，许多重要的环节都影响到检测的质量。现分析如下。

1. 方法学的影响 ：
ELISA试剂盒测定模式包括以下几种：双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法、竞争抑制法，其中竞争抑制法因受操作时差所引起的不公平争等因素的影响，结果重复性较差，质量较难控制。

2. ELISA试剂盒因素 ：
ELISA试剂盒的选择检测的原理均基于抗原抗体反应。由于该反应过程受多种因素的影响，如普遍存在基质效应、交叉反应等，因而检测结果难以溯源，不同方法、不同试剂之间甚至同一试剂不同批号间结果均缺乏可比性。ELISA试剂盒质量在很大程度上决定了检测的水平，因此在引入新项目之前必须对试剂进行严格的评估。

3. ELISA试剂盒的评估有以下几个步骤：
(1) 确定开展该项目的必要性。
(2) 了解该项目现有的检测方法和原理。
(3) 在了解试剂的组成基础上选择多家试剂盒进行比较判断标准参考方法或参考物质，其次为临床的满意度及权威机构的报告如各级室间质量评价、 DC报告等。
(4) 定期对检测结果进行追踪反馈直至终认可该试剂。
4. ELISA试剂盒样本因素：
      标本干扰因素包括内源性干扰因素和外源性干扰因素，前者包括类风湿因子、补体、异嗜性抗体、自身抗体、溶菌酶等，后者包括标本溶血、标本被污、标本贮存时间过长、标本凝固不全、冷冻标本的反复冻融等。其中外源性干扰因素是我们在检测过程中可以避免也是必须避免的因素，而避免内源性因素的干扰则主要通过选择合适的试剂盒。在临床中遇到少见的疑难病例时应当考虑到内源性干扰因素的存在。