ELISA试剂盒技术可以充分利用单克隆抗体的优点,并能利用某些非免疫反应试剂(如SPA、凝集素等)的作用,发展成为许多新方法。此外,发展ELISA试剂盒技术还可以从酶及其底物两方面着手。
第一,用于ELISA试剂盒技术的酶其种类远远多于可用作RIA检测指示剂的放射性同位素。生物界的酶多种多样,有希望开发很多类型的酶用于ELISA试剂盒,并建立相应的ELISA试剂盒方法。相反,自然界的化学元素是有限的,放射性同位素的种类更加有限。
第二,由于酶的多样性,酶作用底物也有多种多样,与此相对应的生色源或供氢体的种类也有远大的开发和发展潜力。
有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA试剂盒检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。除特殊情况外,在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA试剂盒中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。
血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA试剂盒中可使本底加深。一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,也可加入适当防腐剂。