使用说明:
1 . 根据参考ELISA 试剂盒的实验步骤,在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后,用适当洗涤液洗涤3-5次,每次3-5分钟。
2 . 经HRP 标记物孵育并充分洗涤后,酶标板每孔加入200ul TMB 显色液。
3 . 室温避光孵育3-30 分钟或更长时间(可长达24 小时),直至显色至预期深浅。
4. 加入50 微升2M H2SO4 终止反应,随后在450nm 测定吸光度 如果背景(没有样品的对照孔)显色太深,一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭,另一方面可以考虑缩短显色时间,或降低二抗浓度。 另外,选择适当强度的洗涤液,或延长洗涤时间也会有所帮助。
5 . 适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果,滴一滴稀释二抗在离心管内,检测二抗是否可以被正常显色。
6. 可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系,例如使用生物素检测体系。
7. 可以适当延长显色时间。
注意事项:
1 . TMB 对人体有刺激性,请注意适当防护。
2 . 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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