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PCR试剂盒
RT-PCR试剂盒

克里米亚-刚果出血热病毒RT-PCR试剂盒
货号：JLC-E3133

英文名：克里米亚-刚果出血热病毒RT-PCR试剂盒

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产品信息

克里米亚-刚果出血热病毒RT-PCR试剂盒
产品及特点：
克里米亚-刚果出血热（Crimean-Congo hemorrhagic fever, CCHF），是一类在亚洲、中东、欧洲南部、非洲等地区的丘陵及平原地区广泛流行的蜱传疾病，曾经在全球的 30 余个国家多次爆发并引起致死案例。该病在我国又称新疆出血热（XHF），主要分布于我国西北地区，是我国重要的虫媒疾病之一。该病的致病病原体为克里米亚-刚果出血热病毒（CCHFV），分类学上属于负链 RNA 病毒布尼亚病毒科（Bunyaviridae）内罗病毒属（Nairovirus）。其主要的传播媒介与贮藏宿主为蜱，在经携带该病毒的蜱虫叮咬之后，可出现高热、出血、肾损伤、心血管衰竭等症状，平均致死率约为 30%。克里米亚-刚果出血热病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品是根据 PCR 原理开发的克里米亚-刚果出血热病毒检测的试剂盒。
1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据克里米亚-刚果出血热病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。
规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黄盖）
试剂二	MMLV-Taq Mix	75 μL（红盖）
试剂三	超纯水	1 mL（亮黄盖）
试剂四	克里米亚-刚果出血热病毒 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂五	克里米亚-刚果出血热病毒 RT-PCR 阳性对照（1×10E8 /μL）	50 μL（黄盖）
试剂六	使用手册	1 份

注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA 片段作为阳性对照。
运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。
自备试剂：
样品 RNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备：
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL克里米亚-刚果出血热病毒PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
二、设置RT-PCR反应(20 μL 体系)：
3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成份	N+2 个样品管	RT-PCR 阴性对照	RT-PCR 阳性对照
5×双酶一管式RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
克里米亚-刚果出血热病毒 RT-PCR 引物混合液	各 2 μL	2μL	2μL
N+2 个制备的 RNA 样品	各 12.5μL	--	--
超纯水	--	12.5μL	--
克里米亚-刚果出血热病毒 RT-PCR 阳性对照的 1000倍稀释液	--	--	12.5μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4.上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程	温度	时间
逆转录	42℃	30 min
预变性	95℃	5 min
PCR反应35个循环	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现，才有必要分析样品的实验结果，如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。

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