牛呼吸道合胞体病毒RT-PCR试剂盒,ELISA试剂盒-酶联免疫试剂盒-优质生化试剂供应商|上海晶抗生物

PCR试剂盒
RT-PCR试剂盒

牛呼吸道合胞体病毒RT-PCR试剂盒
货号：JLC-E3285

英文名：牛呼吸道合胞体病毒RT-PCR试剂盒

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产品信息

牛呼吸道合胞体病毒RT-PCR试剂盒
产品及特点：
牛呼吸道合胞体病毒(Bovine Respiartory Syncytial Virus，BRSV)是一种DNA 病毒，在动物中主要感染牛，恶劣养殖环境、长途运输和过早断奶等应激会促进本病的发生，若继发细菌感染则死亡率会大幅提高。本病感染后常无明显临床症状，感染上呼吸道时表现为咳嗽，鼻及眼有分泌物。当严重感染时，病畜表现为厌食、精神不振、体温升高、呼吸急迫、泌乳奶牛产奶量下降、咳嗽、流鼻液、流泪以及流涎等，因此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。为此本公司开发了本产品，可用于在科研领域快速定量检测牛呼吸道合胞体病毒。
1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据牛呼吸道合胞体病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。
规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黄盖）
试剂二	MMLV-Taq Mix	75 μL（红盖）
试剂三	超纯水	1 mL（亮黄盖）
试剂四	牛呼吸道合胞体病毒 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂五	牛呼吸道合胞体病毒 RT-PCR 阳性对照（1×10E8 /μL）	50 μL（黄盖）
试剂六	使用手册	1 份

注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA 片段作为阳性对照。

运输及保存：

低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂：
样品 RNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备：
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL牛呼吸道合胞体病毒PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
二、设置RT-PCR反应(20 μL 体系)：
3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成份	N+2 个样品管	RT-PCR 阴性对照	RT-PCR 阳性对照
5×双酶一管式RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
牛副流感病毒3型 RT-PCR 引物混合液	各 2 μL	2μL	2μL
N+2 个制备的 RNA 样品	各 12.5μL	--	--
超纯水	--	12.5μL	--
牛副流感病毒3型 RT-PCR 阳性对照的 1000倍稀释液	--	--	12.5μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4.上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程	温度	时间
逆转录	42℃	30 min
预变性	95℃	5 min
PCR 反应35个循环	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现，才有必要分析样品的实验结果，如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。

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