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- 产品
禽白血病病毒C亚群RT-PCR试剂盒
编号
成分
规格
试剂一
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer
200 μL（橘黄盖）
试剂二
MMLV-Taq Mix
75 μL（红盖）
试剂三
超纯水
1 mL（亮黄盖）
试剂四
禽白血病病毒C亚群 RT-PCR 引物混合液
100 μL（白盖）
试剂五
禽白血病病毒C亚群 RT-PCR 阳性对照（1×10E8 /μL）
50 μL（黄盖）
试剂六
使用手册
1 份
产品及特点：
1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据禽白血病病毒C亚群的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。
规格及成分：
注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA 片段作为阳性对照。
运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。
自备试剂：
样品 RNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备：
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL禽白血病病毒C亚群PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
二、设置RT-PCR反应(20 μL 体系)：
3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：
|
成份 |
N+2 个 样品管 |
RT-PCR 阴性对照 |
RT-PCR 阳性对照 |
|
5×双酶一管式RT-PCR Buffer |
各 4 μL |
4 μL |
4 μL |
|
禽白血病病毒C亚群 RT-PCR 引物混合液 |
各 2 μL |
2μL |
2μL |
|
N+2 个制备的 RNA 样品 |
各 12.5μL |
-- |
-- |
|
超纯水 |
-- |
12.5μL |
-- |
|
禽白血病病毒C亚群 RT-PCR 阳性对照的 1000倍稀释液 |
-- |
-- |
12.5μL |
|
MMLV-Taq Mix |
1.5 μL |
1.5 μL |
1.5 μL |
|
过程 |
温度 |
时间 |
|
逆转录 |
42℃ |
30 min |
|
预变性 |
95℃ |
5 min |
|
PCR 反应35个循环 |
95℃ |
30 sec |
|
58℃ |
30 sec |
|
|
72℃ |
20 sec |
|
|
延伸 |
72℃ |
7 min |
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