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PCR试剂盒
PCR试剂盒

传染性脾肾坏死病病毒PCR试剂盒
货号：JLC-E7767

英文名：传染性脾肾坏死病病毒PCR试剂盒

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产品信息

传染性脾肾坏死病病毒PCR试剂盒
产品及特点：
传染性脾肾坏死病病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus，ISKNV)引起传染性脾肾坏死病，又叫鳜暴发性出血病，它是一种严重危害淡水养殖鳜的传染性、病毒性疾病，可引起暴发性死亡，我国将其列为二类疫病。传染性脾肾坏死病毒属虹彩病毒科，病毒有囊膜，二十面体，直径 125～145nm，病毒基因组为双链 DNA。传染性脾肾坏死病主要流行于我国南方淡水养殖的鳜中，具有很高的死亡率，对鳜养殖业造成很大的威胁。鳜是 ISKNV的自然宿主和敏感宿主，但该病毒还可以感染 50 多种海、淡水养殖鱼类，因此传染性脾肾坏死病病毒的快速诊断具有重要意义。
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增传染性脾肾坏死病病毒，与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1mL（红盖）
试剂二	超纯水	1mL（亮黄色）
试剂三	传染性脾肾坏死病病毒PCR引物混合液	100μL（白盖）
试剂四	传染性脾肾坏死病病毒PCR阳性对照（1×10E8 /μL）	50μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂：
样品 DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备：
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 传染性脾肾坏死病病毒 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置PCR反应(40 μL 体系)：
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成份	N+2个样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各20μL	20μL	20μL
传染性脾肾坏死病病毒PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	--	--
PCR阴性对照（水）	--	18μL	--
PCR阳性对照（传染性脾肾坏死病病毒PCR阳性对照1000倍稀释液）	--	--	18μL

4.按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应35个循环	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

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