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PCR试剂盒
PCR试剂盒

猪圆环病毒1型PCR试剂盒
货号：JLC-E7875

英文名：猪圆环病毒1型PCR试剂盒

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产品信息

猪圆环病毒1型PCR试剂盒
产品及特点：
猪圆环病毒(porcine circovirus，PCV)在分类学上属圆环病毒科圆环病毒属，为已知的最小的动物病毒之一。病毒粒子直径 14-17nm，呈 20 面体对称结构，无囊膜，含有共价闭合的单股环状负链 DNA，基因组大小约为 1.76kb。PCV 对外界理化因子的抵抗力相当强。PCV-1 是在 1974 年由德国学者Tischer 从多株连续传代的 PK-15 细胞中最先发现，无致病性但能产生血清抗体，并且在调查的猪群中普遍存在。本产品就是根据猪圆环病毒 1 型保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增猪圆环病毒1型，与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL(红盖)
试剂二	超纯水	1 mL(亮黄色)
试剂三	猪圆环病毒1型 PCR 引物混合液	100 μL(白盖)
试剂四	猪圆环病毒1型 PCR 阳性对照(1×10E8/μL)	50 μL(黄盖)
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样品 DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备：
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL 猪圆环病毒1型 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置PCR反应(40 μL 体系)：
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成份	N+2 个样品管	PCR 阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
猪圆环病毒1型PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	--	--
PCR 阴性对照(水)	--	18μL	--
PCR 阳性对照(猪圆环病毒1型PCR阳性对照1000倍稀释液)	--	--	18μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应3个循环	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

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