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    巴斯德氏杆菌属通用PCR试剂盒

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巴斯德氏杆菌属通用PCR试剂盒
产品及特点：
巴斯德杆菌属（Pasteuria spp.）为一类具有分支和隔膜菌丝的产芽孢细菌，属内各种之间在菌体形态、孢子的形状与大小、芽孢附属物的存在以及芽孢的形状和大小等细菌特征上表现出不均一性。巴斯德杆菌不仅分布广泛，已在五大洲及大西洋、太平洋及印度洋的岛屿上发现，而且其寄生的线虫种类繁多，至今已在自由生活线虫、捕食性线虫、植物寄生线虫和昆虫病原线虫四大类群的 116 个属 323 个种的线虫体内发现这类细菌。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增巴斯德氏杆菌属通用，与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
规格及成分：

编号

成分

规格

试剂一

PCR MagicMix 3.0

1 mL（红盖）

试剂二

超纯水

1 mL（亮黄色）

试剂三

巴斯德氏杆菌属通用 PCR 引物混合液

100 μL（白盖）

试剂四

巴斯德氏杆菌属通用 PCR 阳性对照（1×10E8 /μL）

50 μL（黄盖）

试剂五

使用手册

1 份

运输及保存：

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样品DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备：
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 巴斯德氏杆菌属通用 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）：
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成份

N+2 个样品管

PCR 阴性对照

PCR阳性对照

PCR Magic Mix 3.0

各 20μL

20μL

20μL

巴斯德氏杆菌属通用PCR 引物混合液

各2μL

2μL

2μL

N+2个样品DNA模板

各18μL

--

--

PCR 阴性对照（水）

--

18μL

--

PCR 阳性对照（巴斯德氏杆菌属通用PCR阳性对照1000倍稀释液）

--

--

18μL

4.按下表设置 PCR 反应：

成份

N+2 个样品管

PCR 阴性对照

PCR阳性对照

PCR Magic Mix 3.0

各 20μL

20μL

20μL

巴斯德氏杆菌属通用PCR 引物混合液

各2μL

2μL

2μL

N+2个样品DNA模板

各18μL

--

--

PCR 阴性对照（水）

--

18μL

--

PCR 阳性对照（巴斯德氏杆菌属通用PCR阳性对照1000倍稀释液）

--

--

18μL

三、电泳检测：
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

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