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    亮热厉螨（小蜂螨病）PCR试剂盒

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亮热厉螨（小蜂螨病）PCR试剂盒
产品及特点： 
亮热厉螨 (Tropiladaps clareae) 又 叫 小蜂螨 ， 引 起 蜜 蜂 的 蜂 螨 病（acariasis of bees），可以使蜜蜂的幼虫和蛹严重受害，它不但可以使幼虫大批死亡，腐烂变黑，而且也可使蛹和新出房的幼虫变得残缺不全，蜂群中可见子脾上有不少的巢房盖被咬破，有的幼虫未化成蛹就死去，有的化蛹后不能羽化，有的羽化出房时，翅膀残缺不全，幼蜂发育不良，在巢门前或场地上乱爬。螨病严重的蜂群，由于新蜂不能产生，成年蜂大批死亡，蜂群迅速削弱、甚至全群覆灭。因此快速准确诊断亮热厉螨具有重要意义。为此本公司基于 PCR 原理开发了本产品，它具有下列特点： 
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增亮热厉螨（小蜂螨病），与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
规格及成分：

编号

成分

规格

试剂一

PCR MagicMix 3.0

1 mL（红盖）

试剂二

超纯水

1 mL（亮黄色）

试剂三

亮热厉螨（小蜂螨病） PCR 引物混合液

100 μL（白盖）

试剂四

亮热厉螨（小蜂螨病） PCR 阳性对照（1×10E8 /μL）

50 μL（黄盖）

试剂五

使用手册

1 份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样品DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备：
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 亮热厉螨（小蜂螨病）PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）：
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成份

N+2 个样品管

PCR 阴性对照

PCR阳性对照

PCR Magic Mix 3.0

各 20μL

20μL

20μL

亮热厉螨（小蜂螨病）PCR 引物混合液

各2μL

2μL

2μL

N+2个样品DNA模板

各18μL

--

--

PCR 阴性对照（水）

--

18μL

--

PCR 阳性对照（亮热厉螨（小蜂螨病）PCR阳性对照1000倍稀释液）

--

--

18μL

4.按下表设置 PCR 反应：

过程

温度

时间

预变性

95℃

5 min

   PCR 反应（35 个循环）

95℃

30 sec

55℃

30 sec

72℃

40 sec

延伸

72℃

7 min

三、电泳检测：
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

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