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    鲁氏耶尔森菌PCR试剂盒

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鲁氏耶尔森菌PCR试剂盒
产品及特点: 
鲁氏耶尔森菌(Yersinia ruckeri)是革兰氏阴性肠杆菌,可感染多种鱼类,鲑科鱼类影响特别明显, 是造成鲑科鱼类肠炎红嘴病(enteric redmouthdiseases,ERM)的主要病原菌。被感染的鱼可以观察到异常的行为变化,包括在水面附近游动、食欲不振和异常游动(如竖游、旋游、倒游等);患病鱼还表现出其他体征如:眼球突出、皮肤变黑、口腔和咽喉及其周围皮下出血、肛门红肿有异物流出等。鲁氏耶尔森菌侵染初期出现患病典型症状的鱼较少,感染后短时间内疾病大规模暴发, 死亡严重。本产品是根据 PCR 原理开发的鲁氏耶尔森菌检测试剂盒,它具有下列特点: 
1. 即开即用,用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增鲁氏耶尔森菌,与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次,但只能用于科研。
规格及成分:

编号

成分

规格

试剂一

PCR MagicMix 3.0

1 mL(红盖)

试剂二

超纯水

1 mL(亮黄色)

试剂三

鲁氏耶尔森菌 PCR 引物混合液

100 μL(白盖)

试剂四

鲁氏耶尔森菌 PCR 阳性对照(1×10E8 /μL)

50 μL(黄盖)

试剂五

使用手册

1 份

运输及保存:
低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
自备试剂:
样品DNA。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备:
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品,则需要做N+2个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL 鲁氏耶尔森菌PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系):
3. 对N+2个样品,在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照,故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分:

成份

N+2 个样品管

PCR 阴性对照

PCR阳性对照

PCR Magic Mix 3.0

20μL

20μL

20μL

鲁氏耶尔森菌PCR 引物混合液

2μL

2μL

2μL

N+2个样品DNA模板

18μL

--

--

PCR 阴性对照(水)

--

18μL

--

PCR 阳性对照(鲁氏耶尔森菌PCR阳性对照1000倍稀释液)

--

--

18μL

4.按下表设置 PCR 反应:

过程

温度

时间

预变性

95℃

5 min

   PCR 反应(35 个循环)

95℃

30 sec

55℃

30 sec

72℃

40 sec

延伸

72℃

7 min

三、电泳检测:
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实 验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

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