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PCR试剂盒
PCR试剂盒

气单胞菌通用PCR试剂盒
货号：JLC-E9082

英文名：气单胞菌通用PCR试剂盒

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产品信息

气单胞菌通用PCR试剂盒
产品及特点：
气单胞菌属（Aeromonas spp.）属于气单胞菌科，广泛分布于自然界，可从水源、土壤以及人的粪便中分离，引起的疾病广泛存在于哺乳动物（如人、鸟类等）和冷血动物（如鲑、鱼、蛇等）中。在人类主要引起肠内感染和肠外感染，前者主要表现为胃肠炎，患者通常呈症状较轻的水样腹泻，症状严重，呈血性粪便且便中有大量白细胞者（和志贺菌引起的痢疾很相似）较少见，本菌是夏季腹泻的常见病原菌之一，主要致病物质为溶血毒素和细胞毒素；后者包括败血症、伤口、眼、关节、腹腔内及其他感染，主要与外伤后伤口接触了污染的水有关。因此快速灵敏检测气单胞菌具有重要的意义，本试剂盒就是为此目的根据 PCR 原理开发，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增气单胞菌通用，与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	气单胞菌通用 PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	气单胞菌通用 PCR 阳性对照（1×10E8 /μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样品DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备：
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加10μL气单胞菌通用PCR阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）：
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成份	N+2 个样品管	PCR 阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
气单胞菌通用PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	--	--
PCR 阴性对照（水）	--	18μL	--
PCR 阳性对照（气单胞菌通用PCR阳性对照1000倍稀释液）	--	--	18μL

4.按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应35个循环	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

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