链霉亲和素磁珠（Streptavidin Beads）使用说明书与操作注意事项

生物科学
细胞生物学

链霉亲和素磁珠（Streptavidin Beads）
货号：JLC_K6131

英文名：链霉亲和素磁珠

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产品信息

链霉亲和素磁珠（Streptavidin Beads）

简介：

使用强有力的偶联技术将磁珠粒子表面全部用于结合天然的链霉亲和素，提高生物素标记分子的捕捉能力和降低背景信号。结合的链霉亲和素磁珠表面具有更高的功能稳定和更优良的均匀性。磁珠表面拥有一层具有很强键合能力的链霉亲和素，同时具有优异的可重复性。具有高效的液相反应动力学特性。磁珠粒径1000nm。由聚苯乙烯包覆。本公司提供不同包装规格的产品1mL、5mlL、20mL。固含量为10mg/ml。

储存：

悬浮于10mM pH7.4的PBS缓冲液中其中（0.02% Proclin300，0.02% Tween 20），2-10℃保存，保质期为18个月。储存时磁珠容器要竖直存放，保证沉降下来的磁珠被溶液保护，防止粘附在管壁上面的磁珠失水，磁珠生物活性下降。避免冰冻，冰冻后可能造成磁珠活性下降。1mg链霉亲和素磁珠可结合 1000 pmoles游离生物素400 pmoles生物素化寡核苷酸15ug生物素化抗体。双链DNA结合情况与片段长度有关。

原理：

链霉亲和素偶联的磁珠作为固相基质可简便快捷、有效地与许多生物素化复合物结合，如小分子肽类、蛋白、抗体、糖类、凝集素、寡合核苷酸DNA/RNA等，因而其可用于分子与免疫诊断、细胞分选、cDNA表达文库的建立和药物筛选等。

注意：

链霉亲和素磁珠结合能力与特定靶分子的大小有关。确保样品中无过量的游离生物素存在，因为游离生物素比大分子量的靶分子更容易与链霉亲和素结合。生物素化引物扩增的PCR产物溶液中，尽量去除游离生物素化引物，然后与磁珠结合，因为生物素标记的引物比带生物素的DNA片段更容易与磁珠结合。去除生物素化引物可以通过超滤法、微透析法，一般的DNA纯化回收也是可以的去除生物素标记的引物。

建议每次应用中，磁珠的用量应通过滴定法进行优化，配体分子的大小和生物素化程度均可能影响二者结合能力。磁珠与生物素化配体的比例会直接影响整个实验结果，磁珠数量恒定下，生物素化配体在较低溶度情况下，随着生物素化配体溶度的增加，磁珠与配体结合后，其具有的配体结合靶物质能力提高，但是超过饱和吸附后，生物素化配体增加，不能提高磁珠配体结合体的与靶物质结合能力。

生物素化配体的制备，推荐使用如Pierce 或 Sigma生产的生物素化试剂。不同的功能集团：胺类、巯基羧基碳水化合物、酪氨酸和组氨酸侧链、胍、胞嘧啶碱基都可以用生物素标记。生物素化过程中可能造成靶分子的活性丧失，需要根据具体应用避免。在DNA合成过程中一般是在寡核苷酸引物5’端标记生物素，用Pierce或Sigma的biotin-X-NHS Ester可以将蛋白质生物素化。当磁珠与配体结合后，用配体去捕获目标物，需要保证靶物质游离在溶液中，而且与配体结合的位点裸露在外面。

操作步骤(供参考)：

磁珠准备

1、使用前涡旋均匀（也可采用超声分散，将试管小心放入普通超声波清洗器中，超声3min左右），用移液器取需要量的磁珠到一离心管中。

2、离心管置于磁力架中约1分钟左右可完成分离。用移液器移除液体。

3、加入特定实验的洗涤液体，试管盖好，漩涡震荡混匀。然后磁分离移除液体。

4、重复1~2次洗涤步骤，并将磁珠悬浮于适量溶液。

做抗体或蛋白相关实验前可采用PBS或生理盐水缓冲溶液洗涤SA磁珠2~3遍；做核酸相关实验前应使用1× B&W Buffer洗涤至少3遍后使用。2× B&W Buffer：10mM Tris-Hcl(pH7.5) 1mM EDTA 2M NaCl。本产品未添加核糖核酸酶，做RNA相关实验前应做去除RNase处理，RNA实验：使用溶液A（A液：DEPC-treated 0.1M NaOH DEPC-treated 0.05M NaCl）洗涤SA磁珠两次，每次2min，再用溶液B （DEPC-treater 0.1M NaCl）洗涤一次，最后将SA磁珠悬浮于B液中。

与生物素化配体结合：

链霉亲和素磁珠与Biotin-Antibody或Biotin- Peptides的结合

1、计算磁珠和生物素化抗体所需用量。每mg链霉亲和素磁珠最大量结合15ug 抗体或300pmol生物素化多肽，通常不需要加入饱和抗体/多肽。

2、悬浮磁珠后和生物素化抗体在室温下孵育30分钟，旋转混匀。

3、孵育后，离心管置于磁力架2分钟，移除上清。

4、用PBS/BSA洗涤磁珠4-5次。

5、悬浮磁珠稀释至所需浓度，用于下游实验。

链霉亲和素磁珠与核酸的结合：

1、取适量洗涤好的磁珠。

2、用2xB&W缓冲液悬浮磁珠使终浓度为1ug/ul或实验的适宜浓度。

3、加等体积的生物素化DNA/RNA 溶液。

4、室温下，旋转或轻敲离心管混合。30bp左右片段孵育10分钟左右，1kb左右片段孵育15分钟。