一、基本信息

细胞名称

NCI-H460/DDP人大细胞肺癌顺铂耐药株

细胞品牌

江蓝纯生物

细胞规格

1×10⁶cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装

细胞来源

人

生长特征

贴壁生长

细胞形态

上皮样

细胞代数

10代以内

重要提醒

培养瓶中的培养基是不含药物的，待细胞状态良好，稳定生长时，可以用含加含40nM的吉西他滨药物培养基处理48h，期间若有部分细胞悬浮起来，属于正常情况，通过换液去掉即可。冻存时请不要在培养基中加药物。

传代方法

1：2传代

培 养 基

RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBSNCI-H460/cis完全培养基

培养条件

气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

冻存条件

无血清冻存液，液氮储存

供应范围

仅用于科研使用，不得用于其它用途

观察

收到细胞后，请及时核对培养瓶上标注的细胞名称是否与订购的细胞名称一致以及培养瓶是否有破损或漏液等异常情况。

处理

1、75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。

2、显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40x,100x,200x各一张）前三天照片为重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。

3、不要打开培养瓶盖，将细胞放入37度培养箱中静置3-4小时后再做处理，以稳定细胞状态。

4、收到细胞后，及时查看说明书是贴壁细胞还是悬浮细胞形态，并按常规贴壁或悬浮细胞的传代方法操作。

贴壁

未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。首次传代，建议1:2传代（两个T25）。（传代时建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，进行对比培养。）

二、细胞培养操作

T25瓶

收货处理

用75%酒精擦拭细胞瓶表面，放37度培养箱内静置培养2-4h，以便稳定细胞状态

传代密度

细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

传代比例

首次传代建议1:2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。
是1个T25瓶传2个10cm皿

传代方法

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min。

3、弃上清，沉淀细胞用1-2ml 完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养。

注意事项

个别细胞贴壁不牢，在运输过程中发生细胞脱落，这是正常现象。请将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清（后期对比培养使用），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加 5ml 完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml 完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养。注意：如收到密封培养瓶，处理完后放入培养箱培养时要将培养瓶盖子拧松。

冻存管

收货处理

1、收到细胞后，检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等问题，请即时联系。

2、将细胞取出转移至液氮或－80度冰箱保存，建议尽早复苏。

3、复苏第一管如有活性状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。特别说明：未与我方联系擅自复苏第二管出现问题不予售后。

传代密度

第二天换液并检查细胞密度

传代比例

一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶

传代方法

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）第二天换液并检查细胞密度。

注意事项

1. 收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察
若未融化可以将细胞按正常步骤保存。

2. 为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞。

冻存

细胞冻存

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5mi。

3、弃上清，沉淀细胞加入1ml/支的富衡无血清冻存液（FH7001），混匀后加入冻存管中。如：冻一支，加入1ml无血清冻存液）

4、将冻存细胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要将细胞转入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放24小时以上。

三、售后服务

细胞予重发

1. 细胞运输中遭遇的各种问题，细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等，重发。

2. 收到细胞未开封，如出现污染状况，重发。

3. 收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发。

4. 常温发货的细胞静置2小时后，干冰冻存发货的细胞复苏2天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发。

5. 常温发货的细胞静置22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后，出现污染，经核实后，重发。

6. 细胞活性问题，请在收到产品3天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发。

细胞不重发

1. 客户操作造成细胞污染，不重发。

2. 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发。

3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发。

4. 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发。

5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发。

6. 收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发。