1.标曲不显色或显色很弱，样本显色：

溶解标准品以及倍比稀释时，未涡旋轰动或不可充沛。标准品溶解、倍比稀释时均需求涡旋轰动以保证充沛混匀。单纯依托移液器重复吹打，效率较低、效果也不必定jia。

2.样本经不同梯度稀释，ELISA试剂盒核算得到的样本值差异较大：

有时分咱们不清楚样本中目的蛋白的浓度怎样，应该怎样稀释，那么咱们就会做下预实验，确认稀释倍数。但是有时分同一样本做了几个不同梯度稀释后，核算得到的样本值之间差异较大。

3.本底偏高：

样本值测不到标曲的本底即Blank孔的OD值一般要求控制在0.1以下(关于高敏ELISA可以恰当放宽要求)。尤其是样本值特别低的时分，本底过高会掩盖目的信号，导致无法测到样本值。在参加TMB显色后，需实时观察标曲显se情况。通常在S5孔有肉眼可见的弱小蓝色，即可中止反应。

4.标曲显色，样本不显色：

当样本中目的蛋白浓度极低或者样本中搅扰要素较强，就无法检测到。现在ELISA试剂盒仍然是蛋白检测活络度gao的方法，与不同技能结合后，衍生出了多种类型的ELISA，提高了检测活络度。

5.不同试剂盒中的组分能否通用：

除非是共用的试剂如洗液、检测缓冲液，其它组分不主张用其它试剂盒的组分，乃至是同一目标不同批次的试剂盒里的组分。这些组分(包含标准品、标准品稀释液、检测抗体、酶等)都是经过优化的，假如轻率运用其它试剂盒的组分，有或许对效果产生影响。