霍山石斛PCR试剂盒
产品及特点：
石斛类药材作为名贵中药，药用历史悠久、来源广泛, 掺伪现象极为突出。其中霍山石斛、铁皮石斛和齿瓣石斛因形态结构的相似性，常相互混伪，特别是经过炮制加工成枫斗或干条后，形态特征已破坏，霍山石斛的“龙头凤尾”、铁皮石斛叶鞘紫斑等特征不显著，难以从性状上进行区分。本产品是根据 PCR 原理开发的霍山石斛检测试剂盒，
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增霍山石斛，与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	霍山石斛PCR引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	霍山石斛PCR阳性对照（1×10E8/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样品 DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备：
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加10μL霍山石斛PCR阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置PCR反应(40 μL 体系)：
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成份	N+2 个样品管	PCR 阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
霍山石斛PCR引物混合液	各 2μL	2μL	2μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	--	--
PCR 阴性对照（水）	--	18μL	--
PCR阳性对照(霍山石斛PCR阳性对照1000倍稀释液）	--	--	18μL

4.按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应35个循环	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。