一、基本信息

细胞名称

B16-F10/GFP小鼠黑色素瘤细胞带绿色荧光

细胞品牌

江蓝纯生物

细胞规格

1×10⁶cells/T25培养瓶

细胞英文

B16-F10/GFP

基本形态

上皮样 ; 多角形  

传代方法

1 : 2传代

培养条件

气相：空气，95%；CO2,5% ；温度：37℃

生长特性

贴壁生长

消化时间

4- 5分钟

冻存条件

无血清细胞冻存液

完全培养基

1640+10%FBS

培养环境

37℃，5%CO2，95%AIR

供应范围

仅供科研使用

注意事项

每传 10 代左右，用嘌呤霉素（4ug/ml）巩固一下

二、细胞操作

到货处理

1、收到细胞后，检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等问题，请即时联系。

2、将细胞取出转移至液氮或－80度冰箱保存，建议尽早复苏。

3、复苏第一管如有活性状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。

细胞复苏

1、从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。

2、将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min。

3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种T25培养瓶，于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。

4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

细胞传代

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min。

3、弃上清，沉淀细胞用1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代（两个 T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。

细胞冻存

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min。

3、弃上清，沉淀细胞加入1ml/支的无血清冻存液，混匀后加入冻存管中。（如：冻一支，加入1ml 无血清冻存液）

4、将冻存细胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要将细胞转入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放24小时以上。

T25细胞到货处理

观察

1、收到细胞后，请及时核对培养瓶上标注的细胞名称是否与订购的细胞名称一致以及培养瓶是否有破损或漏液等异常情况。

处理

1、75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。
2、显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40x,100x,200x各一张）前三天照片为重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。

3、不要打开培养瓶盖，将细胞放入37度培养箱中静置3-4小时后再做处理，以稳定细胞状态。

4、收到细胞后，及时查看说明书是贴壁细胞还是悬浮细胞形态，并按常规贴壁或悬浮细胞的传代方法操作。

贴壁

未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。首次传代，建议1:2传代两个T25，传代时建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，进行对比培养。

细胞注意事项

个别细胞贴壁不牢，在运输过程中发生细胞脱落，这是正常现象。

请将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清（后期对比培养使用），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。

（注意：如收到密封培养瓶，处理完后放入培养箱培养时要将培养瓶盖子拧松)

三、细胞备注

备注1

建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于本公司技术部沟通交流。

备注2

如果细胞在运输中出现问题，可能个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

备注3

江蓝纯生物客户在细购买细胞过程中各种问题，可以随时拨打免费服务电话021-54720761，我们随时给予实验中的解答。

四、售后服务

细胞予重发

1. 细胞运输中遭遇的各种问题，细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等，重发。

2. 收到细胞未开封，如出现污染状况，重发。

3. 收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发。

4. 常温发货的细胞静置2小时后，干冰冻存发货的细胞复苏2天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发。

5. 常温发货的细胞静置22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后，出现污染，经核实后，重发。

6. 细胞活性问题，请在收到产品3天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发。

细胞不重发

1. 客户操作造成细胞污染，不重发。

2. 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发。

3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发。

4. 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发。

5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发。

6. 收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发。