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  • 梅毒螺旋体探针法荧光定量PCR试剂盒

  • Treponema pal lidum Probe qPCR Kit

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JLC007477 50次 3-7天 询价
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梅毒螺旋体探针法荧光定量PCR试剂盒
产品及特点：

本试剂盒可用于检测梅毒螺旋体。梅毒螺旋体（Treponema pallidum, Tp）感染引起慢性传染性疾病——梅毒，其病程复杂，早期侵犯生殖器和皮肤，晚期侵犯全身各器官，可通过性行为传播，母婴传播，危害性极大。本产品是根据探针法荧光定量 PCR 原理开发的梅毒螺旋体检测试剂盒，它具有下列特点：
1.   即开即用，用户只需要提供 DNA  模板。
2.   提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
3.   反应快速，灵敏度高。
4.   本试剂盒足够做 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 50 次，只能用于科研。
规格及成分：

产品组成

规格

2 ×Probe qPCR Mix

550 μL

DEPC-H2O

1 mL

荧光模板稀释液

1 mL

梅毒螺旋体 qPCR 引物-探针混合液

90 μL

梅毒螺旋体 qPCR 阳性对照(1.00E+08  拷贝/μL)

50 μL

运输及保存：
低温运输、-20℃保存，有效期一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样品 RNA
使用方法：
一、DNA 提取(样本制备区)
1. （选做）如果有 N 个样品待提取，最好设置 N+2 个提取，多出的是 PC（样品制备阳性对照）和 NC（样品制备阴性对照）。可以取阳性对照的 1000 倍稀释液 10μL 再加上一定量的水，使总体积与待提取样品的规定体积一致，以此作为 PC。另外用水作为NC。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
2. 用自选方法提取纯化样品 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
二、稀释标准曲线样品(样本制备区)
（由于阳性对照浓度高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，避免污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1.  标记 6 个离心管，分别为 7 ，6 ，5 ，4 ，3 ，2。
2.  用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光模板稀释液，（最好用带芯枪头，下同）。
3.  在 7 号管中加入 5 μL 1.00E+08 拷贝/μL  的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1.00E+07 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4.  换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1.00E+07 拷贝/μL  的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1.00E+06 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5.  换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1.00E+06 拷贝/μL  的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1.00E+05 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6.  重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
若无需制作标准曲线，将阳性对照稀释到 1.00E+05 拷贝/μL 即可。
三、试剂配制(试剂准备区)
准备足量的 qPCR  管（样品管、阴性对照管、阳性对照管），向各 qPCR 管中分别加入下列成分。

成分

N 个

待检样品管

qPCR

阴性对照

qPCR

阳性对照

2 ×Probe qPCR Mix

各 10 μL

10 μL

10 μL

梅毒螺旋体 qPCR 引物-探针混合液

各 1.5 μL

1.5 μL

1.5 μL

DEPC-H2O

6.5 μL

6.5 μL

6.5 μL

转移至模板添加区。
四、添加模板(模板添加区)
向 qPCR 管中分别加入 2 μL 模板，顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、梅毒螺旋体 qPCR 阳性对照，离心 30 秒，立即进行扩增反应。
五、扩增反应(扩增及产物分析区)
将 PCR 管放置在 PCR 扩增仪器样品槽相应位置，进行扩增，扩增程序如下：

过程

温度

时间

预变性

95℃

30min

qPCR 反应（40 个循环）

95℃

15 sec

60℃

15 sec

FAM 通道采集荧光信号

六、结果分析
1.  如果制作标准曲线，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，推算出其浓度。
2.  如果未制作标准曲线，按照如下标准判定结果：
阳性对照（1.00E+05 拷贝/μL）结果：Ct 值<30 ，有明显指数增长，呈典型的 S 型曲线。
阴性对照结果：Ct 值>38 或无 Ct 值，无明显指数增长期和平台期。
样本检测结果：Ct 值<35 ，有明显指数增长，表明样本中检测出该病毒，结果为阳性；Ct 值>38 或无 Ct 值，表明样本中未检测出该病毒，结果为阴性；Ct 值在 35-38 范围，应对样本进行复检，如重复实验结果 Ct 值仍在 35-38 范围，有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

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