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    人外周血中性粒细胞

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JLC_K12680 5x10⁵cells/T25或1mL冻存管 准现货 询价
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一、基本信息

细胞名称

人外周血中性粒细胞

细胞品牌

江蓝纯生物

种属来源

组织来源

外周血

生长特性

悬浮生长

分离方法

通过密度梯度离心法获得

细胞简介

成中性粒细胞(neutrophil)是在瑞氏(Wright)染色血涂片中,胞质呈无色或极浅的淡红色,有许多弥散分布的细小的(0.2~0.4微米)浅红或浅紫色的特有颗粒。细胞核呈杆状或2~5分叶状,叶与叶间有细丝相连。中性粒细胞具趋化作用、吞噬作用和杀菌作用。中性粒细胞来源于骨髓,具有分叶形或杆状的核,胞浆内含有大量既不嗜碱也不嗜酸的中性细颗粒。这些颗粒多是溶酶体,内含髓过氧化酶、溶菌酶、碱性磷酸酶和酸性水解酶等丰富的酶类,与细胞的吞噬和消化功能有关。中性粒细胞来源于骨髓的造血干细胞,在骨髓中分化发育后,进入血液或组织。在骨髓、血液和结缔组织的分布数量比是28:1:25,成年人血液中中性粒细胞的数量约占白细胞总数的55%一70%。

细胞鉴定

CD11b/Integrin alpha M+、CD15+、CD45+或CD18+免疫荧光染色为阳性,细胞纯度高于90%

支原体检测

人外周血中性粒细胞不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

细胞规格

5x10⁵cells/T25或1mL冻存管

培养基

人外周血中性粒细胞专用培养基

培养条件

气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃

冻存条件

无血清冻存液,液氮储存

细胞代数

1代

细胞货期

现货 1周左右

发货方式

复苏发货(免运输费用)/  冻存发货(需加干冰运输费用)

供应范围

仅限于科研实验使用,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

特别说明

具体操作步骤以随货产品说明书为主

二、细胞培养操作

收货处理

取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2,饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态

细胞复苏

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL完全培养基,培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。

传代密度

细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养

传代比例

首次传代建议1:2传代,1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

传代方法

a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。

细胞冻存

待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例

a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5x106~1x107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、注意事项

重要提醒

1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2.在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。

3.传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。

到货须知

1.收到细胞后,首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发,细胞是否解冻,若有上述现象发生请及时和我们联系。

2.静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照(当天以及第 2,3 天请拍照),记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。

3.由于运输的原因,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

4.仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。

四、售后服务

细胞予重发

1. 细胞运输中遭遇的各种问题,细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等,重发。

2. 收到细胞未开封,如出现污染状况,重发。

3. 收到细胞3天内,发现污染问题,经核实后,重发。

4. 常温发货的细胞静置2小时后,干冰冻存发货的细胞复苏2天后,绝大多数细胞未存活,经核实后,重发。

5. 常温发货的细胞静置22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后,出现污染,经核实后,重发。

6. 细胞活性问题,请在收到产品3天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后,重发。

细胞不重发

1. 客户操作造成细胞污染,不重发。

2. 客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发。

3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发。

4. 细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片,不重发。

5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发。

6. 收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的,不重发。

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