一、基本信息 |
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细胞名称 |
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细胞品牌 |
江蓝纯生物 |
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种属来源 |
小鼠 |
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组织来源 |
膀胱 |
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生长特性 |
贴壁生长 |
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细胞形态 |
铺路石状细胞,不规则细胞 |
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细胞简介 |
膀胱壁由三层组织组成,由内外为粘膜层、肌层和外膜。其中,粘膜层为极薄的一层移行上皮组织,和输尿管及尿道黏膜彼此连贯。体外培养膀胱上皮细胞不仅为组织工程膀胱,尿道提供种植细胞的必要手段,也是研究移行上皮细胞肿瘤发生和治疗的基础与前提。 |
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细胞代数 |
第一代 |
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质量检测 |
广谱角蛋白(PCK)免疫荧光染色为阳性,纯度高于 90%,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等 |
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细胞规格 |
51×10⁵cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 |
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培养基 |
小鼠膀胱上皮细胞完全培养基 |
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培养条件 |
气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃ |
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冻存条件 |
无血清冻存液,液氮储存 |
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换液频率 |
每2-3天换液一次 |
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细胞货期 |
现货,1周左右 |
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发货方式 |
复苏发货(免运输费用)/ 冻存发货(需加干冰运输费用) |
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供应范围 |
仅限于科研实验使用,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
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特别说明 |
具体操作步骤以随货产品说明书为主 |
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二、细胞培养操作 |
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T25 |
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初步平衡 |
用75%酒精擦拭细胞瓶表面,放37度培养箱内静置培养2-4h,以便稳定细胞状态 |
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传代密度 |
细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养 |
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传代比例 |
首次传代建议1:2传代,1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 |
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传代方法 |
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min(视细胞情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。 c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。 |
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注意事项
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1.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 2.因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。 |
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冻存管 |
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初步平衡 |
无须平衡,直接放入-80冰箱(不超过一周)或者液氮罐保存,建议尽早复苏 |
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传代密度 |
第二天换液并检查细胞密度 |
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传代比例 |
一管细胞建议接种到6cm培养皿或者T25瓶 |
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传代方法 |
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。 |
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注意事项
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1.收货时若发现干冰化完,检查冻存管是否融化,若已融化需直接离心细胞接种观察,若未融化可以将细胞按正常步骤保存; 2.为保证细胞的高存活率,收到产品后,请立即解冻复苏细胞。 |
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三、细胞冻存操作 |
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冻存液配方 |
无血清冻存液,液氮储存 |
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细胞密度 |
待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例 |
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冻存方法 |
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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注意事项 |
冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
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四、售后服务 |
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细胞予重发 |
1. 细胞运输中遭遇的各种问题,细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等,重发。 2. 收到细胞未开封,如出现污染状况,重发。 3. 收到细胞3天内,发现污染问题,经核实后,重发。 4. 常温发货的细胞静置2小时后,干冰冻存发货的细胞复苏2天后,绝大多数细胞未存活,经核实后,重发。 5. 常温发货的细胞静置22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后,出现污染,经核实后,重发。 6. 细胞活性问题,请在收到产品3天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后,重发。 |
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细胞不重发 |
1. 客户操作造成细胞污染,不重发。 2. 客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发。 3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发。 4. 细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片,不重发。 5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发。 6. 收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的,不重发。 |