一、基本信息 |
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细胞名称 |
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细胞品牌 |
江蓝纯生物 |
种属来源 |
小鼠 |
组织来源 |
血管平滑肌 |
生长特性 |
贴壁生长 |
细胞形态 |
成纤维细胞样 |
细胞简介 |
小鼠主动脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来,小鼠主动脉平滑肌细胞分离自主动脉组织;主动脉是体循环的动脉主干。其运行路径为:升主动脉起于左心室,至右侧第2胸肋关节高度移行为主动脉弓,弓行向左后至第4胸椎体下缘移行为降主动脉;在第12胸椎体高度穿膈的主动脉裂孔移行为腹主动脉,以上为胸主动脉,至第4腰椎体下缘分为左、右髂总动脉;髂总动脉在骶髂关节高度分为髂内、外动脉。主动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后,可见细胞贴壁伸展,细胞形态大小不一,呈梭形、不规则形、三角形或扇形,核卵圆形、居中;2周后细胞汇合,多数细胞伸展呈长梭形,胞浆丰富,有分枝状突起,细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长,高低起伏;细胞密度低时,常交织成网状;密度高时,则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快,4-6天即可汇合,并保持上述形态学特征和生长特点。主动脉平滑肌细胞在心血管疾病发生、发展中具有重要作用,以主动脉平滑肌细胞为实验研究对象,探讨心血管疾病相关发病机制是目前研究的热点;体外培养的主动脉平滑肌细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。 |
质量检测 |
平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色为阳性,纯度高于 90%,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等 |
细胞规格 |
5x10⁵cells/T25或1mL冻存管 |
培养基 |
小鼠主动脉平滑肌细胞完全培养基 |
培养条件 |
气相:空气,95%;二氧化碳,5%;温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80% |
换液频率 |
每2-3天换液一次 |
消化液 |
0.25%胰蛋白酶 |
细胞货期 |
现货,1周左右 |
发货方式 |
复苏发货(免运输费用)/ 冻存发货(需加干冰运输费用) |
供应范围 |
仅限于科研实验使用,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
特别说明 |
具体操作步骤以随货产品说明书为主 |
二、细胞培养操作 |
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收货处理 |
取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2,饱和湿度的细胞培养箱中静置2-4h,以稳定细胞状态 |
传代密度 |
细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养 |
传代代数 |
可传3代左右,建议收到细胞后尽快进行相关实验 |
传代比例 |
首次传代建议1:2传代,1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 |
传代方法 |
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。 c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。 |
细胞复苏 |
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL完全培养基,培养过夜。第三天换液并检查细胞密度。 |
细胞冻存 |
待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例; a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
三、注意事项 |
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重要提醒 |
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。 2.在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。 3.传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。 4.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 |
到货须知 |
1.收到细胞后,首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发,细胞是否解冻,若有上述现象发生请及时和我们联系。 2.静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照(当天以及第 2,3 天请拍照),记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。 3.由于运输的原因,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 4.仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。 |
四、售后服务 |
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细胞予重发 |
1. 细胞运输中遭遇的各种问题,细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等,重发。 2. 收到细胞未开封,如出现污染状况,重发。 3. 收到细胞3天内,发现污染问题,经核实后,重发。 4. 常温发货的细胞静置2小时后,干冰冻存发货的细胞复苏2天后,绝大多数细胞未存活,经核实后,重发。 5. 常温发货的细胞静置22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后,出现污染,经核实后,重发。 6. 细胞活性问题,请在收到产品3天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后,重发。 |
细胞不重发 |
1. 客户操作造成细胞污染,不重发。 2. 客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发。 3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发。 4. 细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片,不重发。 5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发。 6. 收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的,不重发。 |