阿魏酸酯酶(FAE)活性试剂盒50管/48样
测定意义
阿魏酸酯酶(FAE,EC 3.1.1.73),又称肉桂酸酯酶或肉桂酸水解酶,是一种胞外羧酸酯酶,能够水解植物细胞壁中阿魏酸与多糖或木质素之间的酯键,释放游离阿魏酸并促进多糖降解。
NADPH 氧化酶(NAO)将 NADPH 氧化为 NADP+的同时生成超氧阴离子(O2 .- ),接着与显色剂反应生成水溶性的黄色物质。对照通过添加该酶的特异性抑制剂 DPI 排除背景值。最终检测生成的有色物质在 450nm 处的吸光值,即可计算得出 NAO 酶活性大小。
测定原理
阿魏酸酯酶(FAE)催化底物阿魏酸甲酯分解,通过检测阿魏酸甲酯于340nm的下降速率即可得出阿魏酸酯酶(FAE)酶活力大小。
所需的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、无水乙醇、蒸馏水
试剂盒组分与配制
提取液:液体60mLx1瓶,4℃保存;
试剂一:液体8mLx1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存,临用前加入2mL无水乙醇溶解;
标准品:粉剂x1支,若重做标曲,则用到该试剂,4℃避光保存;
预实验的意义
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测,以免造成试剂盒和样本的浪费(比如低表达处理的样本);
2、熟悉生化试剂盒的操作流程,尤其是初次使用生化试剂盒测定;
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适;
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题,以便于及时作出调整;
5、通过3-5组预实验,判断试剂盒对于样本的适应稀释浓度范围,指导实验样本稀释比例。
注意
正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定。