一氧化氮含量(NO)活性试剂盒(硝酸还原酶法)100管/96样
测定意义
NO(Nitric Oxide,NO)广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中,特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质,发挥信号传递的作用,是一种新型的生物信使分子,在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。
测定原理
NO在体内或水溶液中极易氧化变为硝酸盐和亚硝酸盐,通过硝酸盐还原酶还原硝酸盐为亚硝酸盐后,在酸性条件下,亚硝酸盐—与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物,进一步与萘基乙烯基二胺偶合,产物在550nm处有特征吸收峰,测定其吸光值,可以计算NO含量。
自备实验用品及仪器
天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂盒组分与配制
提取液:液体110mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂x1支,-20℃避光保存。临用前加入1mL蒸馏水
试剂二:粉剂x1支,-20℃避光保存。临用前加入1mL蒸馏水
试剂三:液体55μLx1支,-20℃保存。,临用前稀释10倍,避免反复冻融
试剂四:液体1.5mLx1支,4℃避光保存。
试剂五:液体110μLx1支,-20℃保存。临用前稀释10倍,避免反复冻融
试剂六:液体6mL×1瓶,4℃避光保存。(如有析出,可以60℃加热震荡15min)试剂七:液体6mL×1瓶,4℃避光保存。(用之前60℃加热震荡15min)
标准品:液体1mLx1支,4℃避光保存。(10μmol/mL 亚硝酸钠)
试剂准备
试剂二工作液:取20μL试剂二加入1180μL蒸馏水;
显色液:临用前根据样本数量按照试剂六:试剂七=1:1充分混匀,现配现用;
标准液:临用前用蒸馏水将标准品稀释200倍至0.05μmol/mL标准溶液;
预实验的意义
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测,以免造成试剂盒和样本的浪费(比如低表达处理的样本);
2、熟悉生化试剂盒的操作流程,尤其是初次使用生化试剂盒测定;
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适;
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题,以便于及时作出调整;
5、通过3-5组预实验,判断试剂盒对于样本的适应稀释浓度范围,指导实验样本稀释比例。
注意
正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定。