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  • 核苷酸(ATP、ADP、AMP)含量检测试剂盒高效液相色谱法

  • JLC-E9355

    ATP、ADP、AMP Content HPLC Assay Kit

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JLC-E9355 -50T/48S 50T/48S 准现货 询价
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  • 产品信息

英文名称 ：ATP、ADP、AMP Content HPLC Assay Kit
产品包装 ：盒装
产品规格 ：50T/48S
储存条件 ：-20℃
检测方法 ：高效液相色谱法
有 效  期 ：6个月
产品简介 ：核苷酸具有重要的生物学功能，是一类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物，主要参与构成核苷。三磷酸腺苷(ATP)被认为是一种在所有生物体生存和繁殖的细胞合成中必不可少的普遍能量来源。ATP可通过多种细胞途径产生。典型的如在线粒体中通过氧化磷酸化由三磷酸腺苷合酶合成，或者在植物的叶绿体中通过光合作用合成。ATP合成的主要能源为葡萄糖和脂肪酸。
二磷酸腺苷(ADP)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。在生物体内，通常为三磷酸腺苷(ADP)水解失去一个磷酸根，即断裂一个高能磷酸键，并释放能量后的产物。
一磷酸腺苷(AMP)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是在机体内由ATP与AMP释放能量之后形成的。可以继续结合磷酸基团形成二磷酸腺苷(AMP)和三磷酸腺苷(ATP)。是ATP不完全水解的产物。ATP、ADP、AMP在254nm下有吸收峰，可以利用高效液相色谱法根据不同的出峰时间和峰面积来测定不同核苷酸含量。
试验中所需的仪器和试剂 ：高效液相色谱仪(C18柱(4.6×250mm)，紫外检测器(VWD))、台式离心机、可调式移液枪、研钵/匀浆器、棕色EP管、针头式过滤器(50个，水系，0.45µm)，注射器，抽滤器，滤膜(有机系、水系)，棕色进样瓶(50个，2mL)、乙腈(色谱纯，500mL)、超纯水。
产品简介 ：核苷酸具有重要的生物学功能，是一类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物，主要参与构成核苷。
三磷酸腺苷(ATP)被认为是一种在所有生物体生存和繁殖的细胞合成中必不可少的普遍能量来源。ATP可通过多种细胞途径产生。典型的如在线粒体中通过氧化磷酸化由三磷酸腺苷合酶合成，或者在植物的叶绿体中通过光合作用合成。ATP合成的主要能源为葡萄糖和脂肪酸。
二磷酸腺苷(ADP)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。在生物体内，通常为三磷酸腺苷(ATP)水解失去一个磷酸根，即断裂一个高能磷酸键，并释放能量后的产物。
一磷酸腺苷(AMP)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是在机体内由ATP与ADP释放能量之后形成的。可以继续结合磷酸基团形成二磷酸腺苷(ADP)和三磷酸腺苷(ATP)。是ATP不完全水解的产物。
ATP、ADP、AMP在254nm下有吸收峰，可以利用高效液相色谱法根据不同的出峰时间和峰面积来测定不同核苷酸含量。
试验中所需的仪器和试剂：
高效液相色谱仪(C18柱(4.6×250mm)、紫外检测器(VWD))、台式离心机、可调式移液枪、研钵/匀浆器、棕色EP管、0.45µm水系针头式过滤器(50个)、注射器、抽滤器、有机系滤膜、水系滤膜、2mL棕色进样瓶(50个)、色谱纯乙腈(500mL)、超纯水。
产品内容：
提取液一：液体80mL×1瓶，2-8℃保存。
提取液二：液体40mL×1瓶，2-8℃保存。
试剂一：液体15mL×1瓶，2-8℃保存。临用前取3.5mL试剂一加入到1000mL超纯水中，用试剂二调节其pH=6.15，形成流动相B，密封。
试剂二：液体10mL×1瓶，2-8℃保存。
ATP标准品：粉剂×1支，-20℃保存。临用前加入1.8mL蒸馏水配制成1μmol/mLATP标准溶液，-20℃冻存。为了保证ATP的完整性，请避免反复冻融。
ADP标准品：粉剂×1支，-20℃保存。临用前加入2.34mL蒸馏水配制成1μmol/mLADP标准溶液，-20℃冻存。为了保证ADP的完整性，请避免反复冻融。
AMP标准品：粉剂×1支，-20℃保存。临用前加入2.0mL蒸馏水配制成1μmol/mLAMP标准溶液，-20℃冻存。为了保证AMP的完整性，请避免反复冻融。
实验前准备工作：
1. 将500mL色谱纯乙腈(流动相A)和1000mL配制好的流动相B用滤膜抽滤，除去溶剂中杂质，以防堵塞色谱柱。(乙腈采用0.45µm有机系滤膜抽滤，配制好的流动相B采用0.22µm水系滤膜抽滤)。
2. 将配制好的流动相A、B超声30min，除去溶剂中的气体，防止阻塞色谱柱，影响实验结果。
3. ATP标准品的配制：将1μmol/mL的ATP标准溶液用蒸馏水稀释成0.5μmol/mL、0.1μmol/mL、0.05μmol/mL、0.01μmol/mL、0.005μmol/mL的ATP标准品溶液。
4. ADP标准品的配制：将1μmol/mL的ADP标准溶液用蒸馏水稀释成0.5μmol/mL、0.1μmol/mL、0.05μmol/mL、0.01μmol/mL、0.005μmol/mL的ADP标准品溶液。(配制的标准品浓度仅供参考，可根据实际样品浓度进行调整)。
5. AMP标准品的配制：将1μmol/mL的AMP标准溶液用蒸馏水稀释成0.5μmol/mL、0.1μmol/mL、0.05μmol/mL、0.01μmol/mL、0.005μmol/mL的AMP标准品溶液。(配制的标准品浓度仅供参考，可根据实际样品浓度进行调整)。
采用水系针头式过滤器过滤到棕色进样瓶内待测(测试前请提前放置常温状态，以免对保留时间造成影响)。
操作步骤：
一、核苷酸的的提取：
1. 组织样本：按照组织质量(g)：提取液一体积(mL)1:5~10的比例(建议称取0.3g组织样本，加入1.5mL提取液)加入提取液一，冰浴匀浆，然后冰浴浸提40min。4℃条件下10000rpm离心10min，取上清液750μL，加入750μL的提取液二，充分震荡(5min)混匀后，再次在4℃条件下10000rpm离心10min。取上清液，采用水系针头式过滤器过滤到棕色进样瓶内置常温待测(2h之内)。
2. 细胞样本：按照1000万(个)：提取液一体积(mL)1000~500:1的比例(建议取1000万细胞样本，加入1mL提取液一)加入提取液一，冰浴超声波破碎细胞(功率300W，超声3秒，间隔7秒，总时间3min)；于4℃,10000rpm离心10min，取0.75mL上清液，再加入0.75mL提取液二，充分震荡(5min)混匀后，再次在4℃条件下10000rpm离心10min。取上清液，采用水系针头式过滤器过滤到棕色进样瓶内置常温待测(2h之内)。
3. 血清：建议称取0.4mL血清样本，加入0.6mL提取液一，冰浴浸提40min。4℃条件下10000rpm离心10min，取上清液0.75mL，加入0.75mL的提取液二，充分震荡(5min)混匀后，再次在4℃条件下10000rpm离心10min，取上清液，采用水系针头式过滤器过滤到棕色进样瓶内置常温待测(2h之内)。

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