英文名称 :Creatine Content Assay Kit
产品包装 :盒装
产品规格 :100T/48S
储存条件 :2-8℃
检测方法 :微量法
有 效 期 :6个月
产品内容:
试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液一
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液体60mL×1瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液体10mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂一
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粉剂×1 支
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2-8℃保存
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试剂一稀释液
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液体5 mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂二
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液体2 mL×1瓶
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2-8℃保存
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标准品
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粉剂×1 支
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2-8℃保存
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溶液的配制:
1.试剂一:临用前加入0.33mL乙醇溶解,-20℃可以保存2周,试剂若变为深棕色则不可再使用;
2.试剂一工作液:临用前根据样本量按试剂一:试剂一稀释液=40μL:560μL(共600μL,约15T)的比例进行配制,现配现用,当天用完;
3.标准品:1mg一水肌酸。临用前加入1mL蒸馏水,充分溶解,即1mg/mL一水肌酸标准储备液。用不完的试剂4℃保存一个月。
产品说明:
肌酸(Creatine)是一种含氮化合物,自然存在于脊椎动物体内,能够辅助为肌肉和神经细胞提供能量。肌酸可由精氨酸(arginine)、甘氨酸(glycine)及甲硫氨酸(methionine)三种氨基酸合成,可由人体自行合成,也可以从食物中摄取。大约95%的肌酸存在于骨骼肌中,主要存在形式为磷酸肌酸。肌酸作为一种补充剂主要通过增加肌肉质量,增强运动表现能力。肌酸也被作为神经肌肉疾病的一种治疗药被广泛研究,它可能有助于保护神经和改善细胞生物功能状态。
肌酸可在碱性条件下与联乙酰-α-萘酚发生反应,生成红色产物在530nm处有吸收峰。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量)
1.组织:按照质量(g):提取液一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴匀浆后于4℃,12000g离心10min,取0.8mL上清液,再缓慢加入0.15mL提取液二,缓慢吹打混匀至无气泡产生,4℃12000g离心10min后取上清待测。
2.细胞:按照细胞数量(106个):提取液一体积(mL)为5~10:1的比例(建议5×106个细胞加入1mL提取液一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);于4℃,12000g离心10min,取0.8mL上清液,再缓慢加入0.15mL提取液二,缓慢吹打混匀至无气泡产生,4℃12000g离心10min后取上清待测。血清(浆)等液体:取100μL液体加入1mL提取液一,4℃12000g离心10min,取0.8mL上清液,再缓慢加入0.15mL提取液二,缓慢吹打混匀至无气泡产生,12000g离心10min后取上清待测。
注:提取液二需缓慢加入,加入后会产生大量气泡,建议使用2mLEP管进行操作。