英文名称 :Creatine Content Assay Kit
产品包装 :盒装
产品规格 :50T/24S
储存条件 :-20℃
检测方法 :可见分光光度法
有 效 期 :6个月
产品内容:
试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液一
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液体30mL×1瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液体5mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂一
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粉剂×2支
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-20℃保存
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试剂二
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粉剂×2支
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-20℃保存
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试剂三
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粉剂×2支
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-20℃保存
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试剂四A液
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液体15 mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂四B液
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液体15mL×1瓶
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2-8℃保存
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标准品
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粉剂×1 支
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2-8℃保存
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溶液的配制:
试剂一:临用前每支加入 1 mL 蒸馏水,充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃保存。
试剂二:临用前每支加入 0.2 mL 蒸馏水,充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃保存。
试剂三:临用前每支加入 0.5 mL 蒸馏水(100T/48S),充分溶解。为方便储存故多给一支。用不完的试剂分 装后-20℃保存。
试剂四:临用前根据试验所需用量,按照试剂四A液:试剂四 B 液=1:1,充分混匀,现用现配。
标准品:1 mg一水肌酸。临用前加入1 mL蒸馏水,充分溶解, 即1mg/mL一水肌酸标准储备液。临用前取20μL和80μL蒸馏水混合配制成200μg/mL作为标准溶液待测。现用现配。
产品说明:
肌酸(Creatine)是一种含氮化合物,自然存在于脊椎动物体内,能够辅助为肌肉和神经细胞提供能量。肌酸可由精氨酸(arginine)、甘氨酸(glycine)及甲硫氨酸(methionine)三种氨基酸合成,可由人体自行合成,也可以从食物中摄取。大约95%的肌酸存在于骨骼肌中,主要存在形式为磷酸肌酸。肌酸作为一种补充剂主要通过增加肌肉质量,增强运动表现能力。肌酸也被作为神经肌肉疾病的一种治疗药被广泛研究,它可能有助于保护神经和改善细胞生物功能状态。
肌酸酶偶联肌氨酸氧化酶,可将肌酸转化为甘氨酸、甲醛、过氧化氢,过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在505nm有特征吸收峰。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、超声破碎仪。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量)
1、细菌、细胞样本的制备:按照细胞数量(104个):提取液一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液一),冰浴超声波破碎细胞(功率300W,超声3秒,间隔9秒,总时间5min);于4℃,12000g离心10min,取0.8mL上清液,再加入0.15mL提取液二,4℃,12000g离心10min后取上清待测。
2、组织样本的制备:按照质量(g):提取液一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴匀浆后于4℃,12000g离心10min,取0.8mL上清液,再加入0.15mL提取液二,4℃,12000g离心10min后取上清待测。
3、血清(浆):取100μL血清(浆)加入1mL提取液一,4℃,12000g离心10min,取0.8mL上清液,再加入0.15mL提取液二,4℃,12000g离心10min后取上清待测。