肉毒碱棕榈酰转移酶Ⅰ(CPT-1)活性试剂盒微量法/48样
测定意义
肉毒碱棕榈酰基转移酶(Carnitinepalmitoyl transferase, CPT;EC 2.3.1.21)分为CPT-Ⅰ和CPT-Ⅱ两类。CPT-Ⅰ是脂肪酸β氧化过程中的限速酶,位于线粒体外膜,催化长链脂肪酸从酰基辅酶A转移到肉毒碱上,进而从胞浆进入线粒体内部,并且进一步在位于线粒体内膜上的CPT-Ⅱ催化下进行β氧化。肉毒碱棕榈酰转移酶的功能异常可能导致脂肪酸代谢紊乱,进而引起一系列的代谢性疾病。
测定原理
肉碱和棕榈酰辅酶A在肉碱脂酰转移酶(CPT-I)的作用下,产生脂酰肉碱,并释放出游离辅酶A(COA-SH), 与Ellman试剂DTNB反应后,产生黄色的TNB。通过其吸收峰值的变化(412nm),来计算CPT-I的活性。
自备仪器和用品
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰、水浴锅和蒸馏水。
试剂的组成
提取液A: 液体60mL×1瓶,-20℃保存;
提取液B: 液体12mL×1瓶,-20℃保存;
提取液C: 液体0.6mL×2支,-20℃避光保存;
试剂一:液体6mL×1瓶,-20℃避光保存;
试剂二:液体6mL×1瓶,-20℃避光保存;
试剂三:液体2mL×1瓶,-20℃避光保存。
预实验的意义
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测,以免造成试剂盒和样本的浪费(比如低表达处理的样本);
2、熟悉生化试剂盒的操作流程,尤其是初次使用生化试剂盒测定;
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适;
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题,以便于及时作出调整;
5、通过3-5组预实验,判断试剂盒对于样本的适应稀释浓度范围,指导实验样本稀释比例。
注意
正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定。