NADPH氧化酶(NAO)活性试剂盒100管/48样
测定原理
NADPH 氧化酶(NAO)是一个典型的膜蛋白,催化 NADPH 氧化生成 NADP+,并将电子传递给氧原子从而产生超氧阴离子。广泛存在于动物、植物和真菌中。该酶异常可导致人慢性肉芽肿病(GCD),在植物中,该酶与其抗病性和各种胁迫有密切关系。
NADPH 氧化酶(NAO)将 NADPH 氧化为 NADP+的同时生成超氧阴离子(O2 .- ),接着与显色剂反应生成水溶性的黄色物质。对照通过添加该酶的特异性抑制剂 DPI 排除背景值。最终检测生成的有色物质在 450nm 处的吸光值,即可计算得出 NAO 酶活性大小。
所需的仪器和用品
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰、水浴锅和蒸馏水。
试剂盒组分与配制
提取液:液体 60mL ×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 22mL ×1 支,-20℃保存;
试剂二:液体 0.6mL ×1 支,-20℃避光保存;
试剂三:粉体 ×2 支,-20℃避光保存;
试剂四:液体 3mL ×1 支,-20℃避光保存;
预实验的意义
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测,以免造成试剂盒和样本的浪费(比如低表达处理的样本);
2、熟悉生化试剂盒的操作流程,尤其是初次使用生化试剂盒测定;
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适;
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题,以便于及时作出调整;
5、通过3-5组预实验,判断试剂盒对于样本的适应稀释浓度范围,指导实验样本稀释比例。
注意
正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定。