英文名称 :MethylcitrateSynthase(MCS)ActivityAssayKit
储存条件 :-20℃
产品包装 :盒装
检测方法 :可见分光光度法
有 效 期 :6个月
产品规格 :50T/24S
产品组成 :
试剂名称
|
规格
|
保存条件
|
提取液
|
液体30mL×1瓶
|
-20℃保存
|
试剂一
|
液体0.3mL×1支
|
-20℃保存
|
试剂二
|
液体60mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
试剂三
|
液体2.5mL×1支
|
2-8℃保存
|
试剂四
|
粉剂×1支
|
-20℃保存
|
试剂五
|
粉剂×1瓶
|
-20℃保存
|
溶液的配制:
1、试剂四:临用前加入1.5mL蒸馏水充分溶解,未用完的试剂-20℃分装保存4周,避免反复冻融。
2、试剂五:试剂放于棕色瓶内玻璃瓶中,临用前加入3mL蒸馏水充分溶解,未用完的试剂-20℃分装保存4周,避免反复冻融。
产品说明:
甲基柠檬酸合酶(metheyl-citratesynthase,MCS)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,与柠檬酸合酶(CS)共同参与三羧酸循环的调节。
MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸产生甲基柠檬酰辅酶A,进一步水解产生甲基柠檬酸;该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB,在412nm处有特征吸收峰,据此可以计算MCS活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验,如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、天平、低温离心机、水浴锅、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤
一、样本处理(可适当调整待测样本量)
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)和10μL试剂一,进行冰浴匀浆。12000g,4℃离心10min,取上清置于冰上待测。
细菌/细胞:按照细菌/细胞数量(10⁶个):提取液体积(mL)为5~10:1的比例(建议5百万细菌/细胞加入1mL提取液和10μL试剂一),冰浴超声波破碎(功率200W,超声3秒,间隔7秒,总时间5min);然后12000g,4℃离心10min,取上清置于冰上待测。