英文名称 : Lactic Acid(LA) Content Assay Kit
产品包装 : 盒装
产品规格 : 50T/24S
储存条件 : -20℃
检测方法 : 可见分光光度法
有 效 期 : 6个月
自备试剂 : 该试剂盒实验过程中需自备试剂,详情见网站说明书
产品组成:
试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液一
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液体30mL×1瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液体5 mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂一
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液体20 mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂二
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液体60mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂三
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液体24mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂四
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粉剂×1 瓶
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-20℃保存
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试剂五
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液体 5 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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标准品
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粉剂×1 支
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2-8℃保存
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溶液的配制:
1 、试剂二:临用前按试剂二(V):蒸馏水(V)=10μL:450μL的比例配制试剂二溶液,现用现配;
2 、试剂四:临用前每瓶加入8 mL蒸馏水混匀,可分装后-20℃保存,避免反复冻融, -20℃保存 4 周;
3 、标准品:临用前加入1.04 mL蒸馏水配成100μmol/mL的标准溶液2-8℃保存4周。
产品说明:
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物,与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关, 乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸,同时使NAD+还原生成NADH和H+ ,H+传递给PMS生成的PMSH2还原MTT生成紫色物质,在570nm处有特征吸收峰。
技术指标:
低检出限:0.0387 μmol/mL
线性范围: 0.039- 1 μmol/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
天平、研钵/匀浆器、离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅或者恒温培养箱、乙醇和蒸 馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量)
1. 组织:按照质量(g):提取液一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液一)加入提取 液一,冰浴匀浆后于4℃ , 12000g离心10min,取0.8mL上清液, 再缓慢加入0.15mL提取液二,缓慢吹打混匀至 无气泡产生,4℃ 12000g离心10min后取上清待测。
2. 细胞:按照细胞数量(10⁶个):提取液一体积(mL)为5~10:1的比例(建议5×10⁶个细胞加入1mL提取液一), 冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒, 间隔7秒, 总时间3min);于4℃ , 12000g离心10min,取0.8mL上 清液, 再缓慢加入0.15mL提取液二, 缓慢吹打混匀至无气泡产生, 4℃ 12000g离心10min后取上清待测。
3. 血清(浆)等液体:取100μL液体加入1mL提取液一,4℃ 12000g离心10min,取0.8mL上清液,再缓慢加入0.15mL 提取液二, 缓慢吹打混匀至无气泡产生,12000g离心10min后取上清待测。