英文名称 : Lactic Acid(LA) Content Assay Kit
产品包装 : 盒装
产品规格 : 100T/48S
储存条件 : -20℃
检测方法 : 微量法
有 效 期 : 6个月
产品组成:
溶液的配制:
1 , 试剂二:临用前按试剂二(V):蒸馏水(V)=10μL:450μL 的比例配制试剂二溶液,现用现配;
2 , 试剂四:临用前每瓶加入3 mL蒸馏水混匀,可分装后-20℃保存,避免反复冻融, -20℃保存4周,
3 , 标准品:临用前加入1.04 mL蒸馏水配成100μmol/mL的标准溶液;2-8℃保存4周。
产品说明:
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物,与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关, 乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸,同时使NAD+还原生成NADH和H+ ,H+传递给PMS生成的PMSH2还原MTT生成紫色物质,在570nm处有特征吸收峰。
技术指标:
低检出限:0.0771μmol/mL
线性范围:0.078-5μmol/mL
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
天平、研钵/匀浆器、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅、乙醇和蒸馏 水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量)
1. 组织:按照质量(g):提取液一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液一)加入提取 液一,冰浴匀浆后于4℃ , 12000g离心10min,取0.8mL上清液, 再缓慢加入0.15mL提取液二,缓慢吹打混匀至 无气泡产生,4℃ 12000g离心10min后取上清待测。
2. 细胞:按照细胞数量(10⁶个):提取液一体积(mL)为5~10:1的比例(建议5×10⁶个细胞加入1mL提取液一), 冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒, 间隔7秒, 总时间3min);于4℃ , 12000g离心10min,取0.8mL上清液,再缓慢加入0.15mL提取液二, 缓慢吹打混匀至无气泡产生, 4℃ 12000g离心10min后取上清待测。
3. 血清(浆)等液体:取100μL液体加入1mL提取液一,4℃ 12000g离心10min,取0.8mL上清液,再缓慢加入0.15mL 提取液二, 缓慢吹打混匀至无气泡产生,12000g离心10min后取上清待测。