英文名称 : Lacate Dehydrogenase(LDH) Activity Assay Kit
产品包装 : 盒装
产品规格 : 50T/24S
储存条件 : -20℃
检测方法 : 可见分光光度法
有 效 期 : 6个月
产品组成:
试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液
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液体 30mL×1 瓶
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2-8℃保存
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试剂一
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液体25mL×1 瓶
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2-8℃保存
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试剂二
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粉剂×1 支
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-20℃保存
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试剂三
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液体 25mL×1 瓶
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2-8℃保存
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试剂四
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液体 60mL×1 瓶
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2-8℃保存
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标准品
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液体 1mL×1 支
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2-8℃保存
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溶液的配制:
1、试剂二:临用时加入1.3 mL蒸馏水充分溶解备用,配好后可分装成小管-20℃保存,可保存 2 周,禁止反复冻融;
2、标准品:20μmol/mL丙酮酸钠溶液。
产品简介:L-LDH(EC 1.1.1.27)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是糖酵解途径的末端酶,催化丙酮酸与L-乳酸之间的可逆反应,伴随着NAD+/NADH之间互变。
L-LDH催化NAD+氧化L-乳酸生成丙酮酸,丙酮酸进一步与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。试验中所需的仪器和试剂:可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计,恒温水浴锅,台式离心机,可调式移液器,1mL玻璃比色皿,研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪,冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量)
1 、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清,按照细菌或细胞数量(10⁴个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议500万细菌或细胞加入 1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴, 功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次) ;8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2 、组织: 按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3 、血清(浆)样本:直接检测。 若有浑浊离心后取上清测定即可。