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  • α-酮戊二酸(α-KG)含量检测试剂盒微量法

  • JLC-E9324

    α-Ketoglutaric Acid (α-KG) Ccontent Assay kit

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JLC-E9324_1 100T/96S 准现货 询价
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  • 产品信息

英文名称 ：α-Ketoglutaric Acid (α-KG) Ccontent Assay kit
产品包装 ：盒装
产品规格 ：100T/96S
储存条件 ：-20℃
检测方法 ：微量法
有 效 期 ：6个月
产品组成：

试剂名称

规格

保存条件

提取液一

液体110mL×1瓶

2-8℃保存

提取液二

液体17mL×1瓶

2-8℃保存

试剂一

液体13 mL×1瓶

2-8℃保存

试剂二

液体1.2 mL×1支

2-8℃保存

试剂三

粉剂×1瓶

-20℃保存

试剂四

粉剂×1支

-20℃保存

标准品

粉剂×1支

2-8℃保存

溶液的配制：
1、试剂三：临用前加入1.3mL蒸馏水充分溶解。未用完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。
2、试剂四：临用前加入0.5mL蒸馏水充分溶解。未用完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。
3、标准品：临用前加入0.856mL 蒸馏水充分溶解，配制成 80μmol/mLα-酮戊二酸标准溶液， 2-8℃可保存4周。
4、试剂四工作液： 临用前根据样本量按试剂四： 蒸馏水=0.1mL：0.4mL（共 0.5mL，50T）的比例配制，现用现配。
5、400nmol/mL标准溶液配制：实验前取50μL的 80μmol/mL标准溶液，加入950μL蒸馏水充分混合配制成4μmol/mL 标准溶液。再取 100μL 4μmol/mL标准溶液和 900μL 蒸馏水混合配制成0.4μmol/mL（400nmol/mL）标准溶液备用。
产品简介 ：α-酮戊二酸（α-Ketoglutarate，α-KG）是三羧酸循环中重要的代谢中间产物，是连接细胞内碳-氮代谢的关键节点。α-酮戊二酸作为一种短链羧酸分子，是谷氨酰胺、谷氨酸等多种重要的氨基酸的前体，不仅直接参与供能，还参与细胞内多种化学反应，具有多种生理作用。GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD+，引起340nm吸光度下降。通过测定NADH的变化，计算α-酮戊二酸含量。



注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/金属浴/恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、微量石英比色 皿/96 孔 UV 板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、蒸馏水和冰。
操作步骤：
一、样本处理(可适当调整待测样本量)
1. 组织：按照质量（g）：提取液一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液一）加入提取 液一，冰浴匀浆后于4℃ , 12000g离心10min，取0.8mL上清液， 再缓慢加入0.15mL提取液二，缓慢吹打混匀至 无气泡产生，4℃ 12000g离心10min后取上清待测。
2. 细胞：按照细胞数量（10⁶个）：提取液一体积（mL）为5~1：1的比例（建议5百万细胞加入1mL提取液一）， 冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒， 间隔7秒， 总时间3min）；于4℃ , 12000g离心10min，取0.8mL上 清液， 再缓慢加入0.15mL提取液二， 缓慢吹打混匀至无气泡产生， 4℃ 12000g离心10min后取上清待测。
3. 液体：取100μL液体加入1mL提取液一，4℃ 12000g离心10min，取0.8mL上清液，再缓慢加入0.15mL提取液二， 缓慢吹打混匀至无气泡产生，12000g离心10min后取上清待测。

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