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  • 蛋白质游离巯基含量检测试剂盒微量法

  • JLC-E9338

    Protein Disulfide Bond Content Assay Kit

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JLC-E9338 -100T/48S 100T/48S 准现货 询价
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  • 产品信息

英文名称 ：Protein Disulfide Bond Content Assay Kit
产品包装 ：盒装
产品规格 ：100T/48S
储存条件 ：2-8℃
检测方法 ：微量法
有 效  期 ：6个月
产品组成：

试剂名称

规格

保存条件

提取液一

液体 40mL×1瓶

2-8℃保存

提取液二

液体40mL×1瓶

2-8℃保存

试剂一

液体120mL×1瓶

2-8℃保存

试剂二

液体20mL×1瓶

2-8℃保存

试剂三

液体7mL×1瓶

2-8℃保存

试剂四

液体1mL×1支

2-8℃保存

标准品

粉剂×1 支

2-8℃保存

溶液的配制：
1、提取液配制：临用前根据样本量按照提取液一：提取液二=1mL：1 mL 进行配制，请勿一次性全部混合。 
2、若试剂二有析出，可置于37℃水浴加热至澄清透明后使用。
3、标准品：10mg还原型谷胱甘肽（GSH）。 临用前加入1.3mL蒸馏水配置成25μmol/mL ，2-8℃保存4周。 
4 、0.125μmol/mL标准品配制：取50μL 25μmol/mL标准品，加入950μL蒸馏水，充分混匀，配制成1.25μmol/mL
的标准品；然后取100μL1.25μmol/mL标准品，加入900μL蒸馏水，充分混匀，配制成 0. 125μmol/mL的标准品备用，现配现用。
产品简介 ：巯基的存在使得蛋白质能够进行二硫键的形成，从而维持分子的稳定性和功能性。此外，巯基还参与到氧化还原反应中，具有重要的生物学作用。在细胞内，巯基含量的变化与多种疾病的发生和进展密切相关，因此巯基也成为了生物医学领域中的重要研究对象。本试剂盒测定的是蛋白质中的游离巯基含量。一定条件下巯基会发生亲核反应，即巯基与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰，据此可以计算蛋白质游离巯基含量。



注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低温离心机、研钵/匀浆器、丙酮（AR）、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理(可适当调整待测样本量)
1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液， 冰浴匀浆后于4℃ , 3000rpm  离心10min ，弃上清。在沉淀中加入2mL试剂一，搅匀后溶解沉淀，沉淀溶解液 作为样本进行实验。（注：（1）植物叶片等纤维含量较高的样本， 溶解沉淀后4℃ 3000rpm离心3min ，取上清 作为样本进行实验,；（2）加入试剂一后会有大量气泡产生， 请缓慢加入，建议使用5mL的EP管）。
2. 细菌/细胞： 按照细菌/细胞数量（10⁶个）：提取液体积（mL）为5~10：1的比例（建议5百万细菌/细胞加入1mL  提取液），冰浴超声波破碎（功率200W，超声3秒， 间隔10秒， 总时间3min）后，于4℃ , 3000rpm  离心10min， 弃上清。在沉淀中加入2mL试剂一，搅匀后溶解沉淀，沉淀溶解液作为样本进行实验。（注：（1）若沉淀溶解 不完全， 可4℃  3000rpm离心3min ，取上清作为样本进行实验；（2）加入试剂一后会有大量气泡产生，请缓 慢加入,建议使用5mL的EP管）。
3. 血清/血浆、牛奶等液体：取100μL液体样本加入0.9mL丙酮，4℃ , 3000rpm  离心10min ，弃上清。在沉淀中 加入2mL试剂一，搅匀后溶解沉淀，沉淀溶解液作为样本进行实验。（注： 若测定数值偏小， 可改变样本与丙 酮的比例， 如取0.2mL液体样本加入0.8mL丙酮或0.3mL液体样本加入0.7mL丙酮，注意同步修改计算公式）。

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