英文名称 :Glutamine (Gln)Content Assay Kit
产品包装 :盒装
产品规格 :50T/48S
储存条件 :-20℃
检测方法 :可见分光光度法
有 效 期 :6个月
自备试剂 :该试剂盒实验过程中需自备试剂,详情见网站说明书
产品组成 :
试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液一
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液体70mL×1瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液体15mL×1瓶(自备)
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2-8℃保存
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试剂一
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液体3mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂二
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粉剂×2瓶
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-20℃保存
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试剂三
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液体10mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂四
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粉剂×1瓶
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-20℃保存
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试剂五
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粉剂×1瓶
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-20℃保存
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试剂六
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液体8mL×1瓶
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2-8℃保存
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标准品
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液体1mL×1支
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2-8℃保存
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溶液的配制 :
1.提取液二:氯仿,需自备。
2.试剂二:试剂质量很小,有可能肉眼观察不到,直接使用即可。临用前取一支加入0.2mL蒸馏水,-20℃分装可保存4周,避免反复冻融。
3.试剂二工作液:提供一空棕色试剂瓶。根据样本量按试剂二:蒸馏水=0.2mL:2.8mL(约18S(的比例进行稀释,现用现配,使用时置于冰上。
4.试剂四:临用前加入40mL提取液一,用不完的试剂分装后-20℃可保存4周。避免反复冻融。
5.试剂五:临用前加入2.5mL试剂一,用不完的试剂分装后-20℃可保存4周,避免反复冻融,使用时置于冰上。
6.标准品:10μmol/mL谷氨酰胺标准液。
产品说明 :
谷氨酰胺(Glutamine)简称Gln,是谷氨酸的酰胺,是组成蛋白质的重要氨基酸之一,同时谷氨酰胺也是三羧酸循环中α-酮戊二酸的主要来源。谷氨酰胺在生物体内以游离态和结合态两种状态存在,游离的谷氨酰胺是在生物体代谢中起着重要作用,其代谢占细胞和血液循环中自由氨基酸的60%以上。游离谷氨酰胺在谷氨酰胺酶的催化作用下转变为谷氨酸,谷氨酸脱氢酶(GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+,在1-mPMS作用下,WST可与NADH反应,产生水溶性formazan,其在450nm处有吸收峰,据此可计算谷氨酰胺含量。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、氯仿、1mL玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量)
1.组织:按照样本质量(g):提取液一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴匀浆;12000g4℃离心5min,取上清加入500µL提取液二,剧烈振荡5min,12000g4℃离心5min,取上层液体(呈清澈状态)置冰上待测(中层浑浊物质和下层液体不需要)。
2.细菌或细胞样本:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清,按照细菌或细胞数量(10⁴个):提取液一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液一)加入提取液一,超声波破碎细菌或细胞(温度4℃,功率200W,超声3s,间隔7s,总时间3min),12000g4℃离心5min,取上清加入500µL提取液二,剧烈振荡5min,12000g4℃离心5min,取上层液体(呈清澈状态)置冰上待测(中层浑浊物质和下层液体不需要)。
3.血清(浆)等液体样本:取500µL样本加入500µL提取液二(若溶液浑浊则需先离心后取上清),剧烈振荡5min,12000g4℃离心5min,取上层液体(呈清澈状态)置冰上待测(中层浑浊物质和下层液体不需要)。
注 :如果需要测蛋白浓度,需在加提取液二之前测定蛋白浓度。