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  • 谷胱甘肽还原酶活性系数(GRAC)检测试剂盒微量法

  • JLC-E9353

    Glutathione Reductase Activation Coefficient Assay Kit

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JLC-E9353 -100T/48S 100T/48S 准现货 询价
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  • 产品信息

英文名称 ： Glutathione Reductase Activation Coefficient Assay Kit
产品包装 ： 盒装
产品规格 ： 100T/48S
储存条件 ： -20℃
检测方法 ： 微量法
有 效  期 ： 6个月
产品组成 ：

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体65mL×1瓶

2-8℃保存

试剂二

粉剂×1支

2-8℃保存

试剂三 A

粉剂×1支

-20℃保存

试剂三 B

液体1mL×1支

2-8℃保存

试剂四

液体1.2mL×1支

2-8℃保存

试剂五

粉剂×1支

-20℃保存

试剂六

液体20 mL×1瓶

2-8℃保存

试剂七

液体25 mL×1瓶

2-8℃保存

溶液的配制：
1.试剂二：临用前加入1.2mL蒸馏水，充分溶解，2-8℃可保存4周；
2.试剂三：临用前取试剂三A加入0.537mL试剂三B，充分溶解，-20℃可分装保存4周，避免反复冻融；
3.工作液：临用前根据样本量按照试剂一：试剂二：试剂三：试剂四=40μL：10μL：4μL：10μL(64μL，1T)的比例配制工作液，现用现配；
4.试剂五：临用前加入1.2mL蒸馏水，充分溶解，-20℃可分装保存4周，避免反复冻融；
试剂五工作液：临用前根据样本量按照试剂五：蒸馏水=5μL：95μL(0.1mL，10T)的比例配制，现用现配。
产品说明：
谷胱甘肽还原酶(GlutathioneReductase，GR)是广泛存在于真核与原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，该酶以核黄素衍生物核黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为辅基，催化NADPH还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH)，维持巯基和膜蛋白处于还原状态。当生物体内缺乏核黄素时，FAD含量相应减少，GR活性也随之降低，谷胱甘肽还原酶活性系数(GRActivationCoefficient，GRAC)迅速升高，出现唇炎、口角炎、结膜炎等临床症状。因此，GRAC用于核黄素营养状况评价，对于早期发现缺乏病患者采取防治措施具有重要意义。
GR催化NADPH还原GSSG，生成GSH，GSH与5，5’-二硫代-双-(2-硝基苯甲酸)(5，5’-dithiobis-2-nitrobenoicacid，DTNB)反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸，2-硝基-5-巯基苯甲酸在波长412nm处有特征吸收峰，通过412nm处吸光度的变化可计算GR的活性。根据加入FAD前后GR活性的变化可计算得到GRAC。




注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、分析天平、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理(可适当调整待测样本量)
1.组织样本：按质量(g)：试剂一体积(mL)=1：5~10比例加入试剂一(建议称取0.1g样本，加入1.0mL试剂一)，冰浴匀浆后，于4℃,12000rpm离心10min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。
2.细胞样本：按细胞数量(104)：试剂一体积(mL)=500~1000：1的比例加入试剂一(建议500万细胞加入1.0mL试剂一)，冰浴超声破碎细胞(功率200W，超声3s，间隔7s，总时间3min)，然后于4℃,12000rpm离心10min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。
3.全血/红细胞：建议取10μL全血/红细胞，加入990μL试剂一，充分溶血混匀，于4℃,4000rpm离心10min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。
4.血清/血浆等液体样本：直接测定。若有浑浊请离心后取上清置于冰上待测。

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