英文名称 : Pyruvate(PA) Content Assay Kit
产品储存 : 2-8℃
产品包装 : 盒装
产品规格 : 50T/48S
检测方法 : 可见分光光度法
产品组成:
试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液
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液体60 mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂一
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液体7 mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂二
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液体30 mL×1瓶
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2-8℃保存
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标准品
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液体1 mL×1支
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2-8℃保存
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溶液的配制:
1 、标准品:20μmol/mL丙酮酸钠标准溶液。
2 、0. 125μmol/mL标准溶液的配制:取50μL 20μmol/mL标准液和450μL蒸馏水混匀,即2μmol/mL标准液;再 取50μL 2μmol/mL标准液和750μL蒸馏水混匀即配成0.125μmol/mL标准溶液。
产品说明:
丙酮酸通过乙酰 CoA 连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢, 起着重要的枢纽作用。丙酮酸与 2,4-二硝基苯肼作用, 生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在碱性溶液中呈樱红色。
技术指标:
低检出限:0.001 μmol/mL
线性范围: 0.0015-0.25 μmol/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量)
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积 (mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎(冰浴, 200W,超声3s, 间隔10s,重复30次),静置30min ,8000g,常温离心10min,取上清待测。
2、组织: 按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆,静置30min ,8000g,常温离心10min,取上清待测。
3、血清(浆)样本等液体:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL液体样本加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆,静置30min ,8000g,常温离心10min,取上清待测。