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  • 辅酶Ⅰ NAD(H)含量检测试剂盒(WST显色法)可见分光光度法

  • JLC-E9389

    CoenzymeⅠNAD(H) Content Assay Kit (WST colorimetry)

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JLC-E9389 -50T/24S 50T/24S 准现货 询价
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  • 产品信息

英文名称　： CoenzymeⅠNAD(H) Content Assay Kit (WST colorimetry)
产品包装　： 盒装
产品规格　： 50T/24S
储存条件　： -20℃
检测方法　： 可见分光光度法
有 效  期　： 6个月
产品组成 ：

试剂名称

规格

保存条件

酸性提取液

液体15mL×1瓶

2-8℃保存

酸性提取液

液体15mL×1瓶

2-8℃保存

试剂一

液体20mL×1瓶

2-8℃保存

试剂二

液体6mL×1瓶

2-8℃保存

试剂三

液体12mL×1瓶

2-8℃保存

试剂四

液体3mL×1瓶

-20℃保存

试剂五

液体40mL×1瓶

2-8℃保存

NAD标准品

粉剂×1支

-20℃保存

NADH标准品

粉剂×1支

-20℃保存

溶液的配制：
1、NAD标准品：临用前加入1.5mL蒸馏水，即2µmol/mL。-20℃可以保存2周。
2、NADH标准品：临用前加入1.4mL蒸馏水，即2µmol/mL。-20℃可以保存2周。
产品说明：
辅酶I包括还原型和氧化型两种形式，在生物氧化中起传递氢的作用。氧化型辅酶I又称烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)是脱氢酶的辅酶，它在糖酵解、糖异生、三羧酸循环和呼吸链中发挥着不可替代的作用。中间产物会将脱下的氢递给NAD，使之成为NADH(还原型辅酶I)。而NADH则会作为氢的载体，在呼吸链中通过化学渗透偶联的方式，合成ATP。NAD(H)在机体内有重要的生理意义，与物质代谢、能量代谢、抗细胞衰老、抗氧化以及一些疾病的发生密切相关。体内辅酶I含量降低会导致细胞损伤或衰亡。
分别用酸性和碱性提取液提取样本中NAD+和NADH，在1-mPMS作用下，WST-1可与NADH反应，产生水溶性formazan，在450nm下有特征吸收峰，而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH，进一步采用WST-1检测。



注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅，研钵/匀浆器、超声破碎仪、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理(可适当调整待测样本量)
1、血清(浆)中NAD+和NADH的提取：
NAD+的提取：建议取0.1mL血清(血浆)，加入0.5mL酸性提取液，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)；冰浴冷却后，10000g，4℃离心10min；取200μL上清液，加入200μL碱性提取液使之中和；混匀，10000g4℃离心10min，取上清，冰上待测。
NADH的提取：建议取0.1mL血清(血浆)，加入0.5mL碱性提取液，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)；冰浴冷却后，10000g，4℃离心10min；取200μL上清液，加入200μL酸性提取液使之中和；混匀，10000g4℃离心10min，取上清，冰上待测。
2、组织中NAD+和NADH的提取：
NAD+的提取：建议取0.1g组织质量，加入0.5mL酸性提取液，冰浴研磨，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)；冰浴冷却后，10000g，4℃离心10min；取200μL上清液，加入200μL碱性提取液使之中和；混匀，10000g4℃离心10min，取上清，冰上待测。
NADH的提取：建议取0.1g组织质量，加入0.5mL碱性提取液，冰浴研磨，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)；冰浴冷却后，10000g，4℃离心10min；取200μL上清液，加入200μL酸性提取液使之中和；混匀，10000g4℃离心10min，取上清，冰上待测。
3、细胞或细菌中NAD+和NADH的提取：
NAD+的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，离心弃上清，建议500万细胞或者细菌加入0.5mL酸性提取液，超声波破碎(冰浴，功率200W，超声3s，停10s，重复30次)，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)；冰浴冷却后，10000g，4℃离心10min；取200μL上清液，加入200μL碱性提取液使之中和；混匀，10000g4℃离心10min，取上清，冰上待测。
NADH的提取：建议500万细胞或者细菌加入0.5mL碱性提取液，超声波破碎(冰浴，功率200W，超声3s，停10s，重复30次)，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)；冰浴冷却后，10000g，4℃离心10min；取200μL上清液，加入200μL酸性提取液使之中和；混匀，10000g4℃离心10min，取上清，冰上待测。

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